方法学考察16PPT课件.pptVIP

1 中药质量标准方法学验证  主讲人：孙启慧 1. 中药质量标准方法学验证的意义？ 2. 中药质量标准方法学验证的主要内 容及方法？ 2 3 方法学验证的目的 Ⅰ 方法学验证：是对测定方法的评价,是建立新方法的研究 内容和依据。 Ⅱ 证明采用的方法是否适合于相应的检测方法或分析要求； Ⅲ 新建立的检测方法、改变原检测方法、工艺变更、处方变更 等均须验证。 4 需验证的分析方法类型 鉴别（薄层鉴别） 限量检查（重金属含量限度检查） 含量测定 溶出度、释放度 残留物（农药残留）、添加物（食品添加剂）等的限度检查 5 需验证的分析方法内容 ①已有重现性验证，不需验证中间精密度。②重现性只有在该分析方法将被法定标准采用时做。③如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。 8 专属性 常用的试验方法 空白阴性对照试验 比较同一分析系统对照品与供试品相应色谱峰的吸收光谱的一致性 9 专属性 空白阴性对照试验的试验要求： TLC：目测观察，空白阴性对照应不得显与供试品检测成分相应的斑点。 HPLC/GC/TLCS：空白阴性对照色谱中，在与相应对照品保留时间相应的位置应无色谱峰或其峰面积小于5% 胃灵颗粒质量标准研究—专属性 10 图 芍药苷含量测定HPLC色谱图 a 芍药苷对照品；b供试品；c白芍阴性对照品；1.芍药苷 11 线性关系考察（Linearity） 线性系指在设计的范围内，测试结果与供试品中被测物浓度（质量）直接呈正比关系的程度。 12 线性试验方法： 制备梯度浓度对照品溶液，以相同体积进样测定峰面积值，制备标准曲线，并以峰面积值与对照品浓度（或量）作线性回归，计算线性方程和相关系数； 制备同一浓度的对照品溶液，以不同体积进样测定，同法处理； 线性测定的浓度应尽量在一较宽的范围，一般使待测成分峰面积处于标准曲线的中间浓度左右为宜； 计算相关系数，要求： TLCS：R＞0.99，HPLC-UV：R＞0.999，HPLC-ELSD：R＞0.995 13 胃灵颗粒质量标准研究—线性关系考察： 表 芍药苷线性范围 图 芍药苷标准曲线 14 范围： 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 考察的区间应尽可能覆盖日后样品可能的含量范围。 验证试验过程中除取样量和进样量可改变外，一般不得改动实验操作过程中规定的如溶剂体积、提取时间、萃取次数等。 15 拓展1：检测限 检测限指供试品中被测物能被检出的最低量 试验方法 采用已知浓度的对照品进行试验 直观法 如薄层色谱检测成分的检出量或毒性成分检出限量的确定。在薄层板上，以已知浓度的对照品点样，依法展开、显色后目测观察，可检出的最小量为检测限。 仪器法（信噪比法）用于能显示基线噪声的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3∶1或2∶1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。 16 拓展2：定量限（Limit of Quantitative, LOQ） 定量限系指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。 试验方法：一般以10倍于噪音的对照品溶液重复点样或进样5-6次，计算重复点样或进样的峰面积值的RSD%。当RSD%＜3%（薄层扫描法）或＜2%（高效液相色谱法/气相色谱法）的浓度（或量）为方法的定量限。若RSD%较大，应重新调整对照品溶液的浓度，进行测定 注：中药不需要做定量限，定量限属于有关物质方法学中的一项，主要是考察仪器能检测的该品种的最小浓度。 17 精密度（Precision） 精密度系指在规定的测试条件下，同一个均匀标准品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度(离散程度) 精密度包括一下三方面： 重复性(Repeatability) 中间精密度(Intermediate precision) 重现性(Reproducibility) 精密度考察应使用均匀稳定的、可信的样品。如果得不到，可用人为配制的样品进行研究。 18 重复性(Repeatability) 重复性:在相同操作条件下，由同一个分析人员在较短的间隔时间内测定所得结果的精密度。 19 重复性 实验要求： 在规定范围内，取样品6份，按供试品制备方法，平行制备6份供试品进样分析，对测定结果进行评价； 或设3个不同浓度9份样品，用9个测定结果进行评价（高低浓度可以结合范围的考察设计，中间浓度为样品平均浓度，计算9份样品的相对标准偏差） 20 重