第八章液相色谱法 课件.ppt

第八章 液相色谱分析 第一节 概述 第二节 柱色谱法 第三节 薄层色谱法 第四节 纸色谱法 色谱法(chromatography)概述 历史：1903年，俄国植物学家Mikhail Tswett 最先发明。他采用填充有固体CaCO3细粒子的玻璃柱，将植物色素的混合物(叶绿素和叶黄素 chlorophylls xanthophylls)加于柱顶端，然后以石油醚淋洗，被分离的组份在柱中显示了不同的色带，他称之为色谱 (希腊语 “chroma”=color; “graphein”=write) 。 概述 在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相 ；自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相；装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱 。当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 色谱法的分类 按两相状态分类 固定相 流动相 1. 气体为流动相的色谱称气相色谱 （gas chromatography , GC） 色谱法的分类 2. 液体为流动相的色谱称液相色谱 （liqud chromatography, LC） 色谱法的分类 按分离机理分类 1. 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法，称为吸附色谱法。 2. 利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分配色谱法。 3. 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法，称为离子交换色谱法。 色谱法的分类 4. 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法，称为凝胶色谱法或分子排阻色谱法。 最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。 色谱法的分类 吸附色谱：不同组份在固定相的吸附作用不同； 分配色谱：不同组份在固定相上的溶解能力不同； 离子交换色谱：不同组份在固定相（离子交换剂）上的亲和力不同； 凝胶色谱（尺寸排阻色谱）:不同尺寸分子在固定相上的渗透作用。 色谱法的分类 按操作形式分类 1. 固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱。 2. 固定相呈平板状的色谱，称为平板色谱，它又可分为薄层色谱和纸色谱。 色谱法基本原理 分配系数K 在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度(或溶解度)之比值，即 色谱法基本原理 色谱机理不同，分配系数的含义不同： 吸附色谱 — K为吸附平衡常数 分配色谱 — K为分配系数 离子交换色谱 — K为交换系数 分子排阻色谱 — K为渗透系数 色谱法基本原理 色谱分离过程的特点: 1. 差速迁移; 2. 谱带扩展. 色谱法的定义: 色谱法是利用混合物各组分在两相(固定相和流动相) 中分布的差异，使固定相对各组分的保留作用不同产生差速迁移而得到分离的一种物理化学分离分析方法。 色谱法基本原理 分配系数与保留行为的关系 溶质在色谱柱中被保留的程度常用保留比（retention ratio）R 表示。 R≤ 1 第二节 柱色谱法 一、液－固吸附柱色谱法 二、液－液分配柱色谱法 三、离子交换柱色谱法 四、凝胶柱色谱法 五、柱色谱法的应用 第二节 柱色谱法 将固定相均匀填在金属或玻璃制成的管中做成层析柱，并以此进行分离的方法叫柱色谱法。 根据作用原理，可分为： 吸附柱色谱法 分配柱色谱法 离子交换柱色谱法 凝胶柱色谱法 第二节 柱色谱法 一、液－固吸附色谱法 liquid-solid adsorption chromatography 固定相—固体吸附剂 流动相—液体 原理： 利用吸附剂对不同组分的吸附能力的差异而实行分离。 第二节 柱色谱法 吸附作用 固体吸附剂是一些多孔性物质，表面上有许多吸附点或称吸附中心。吸附剂之所以具有吸附作用，主要靠吸附剂表面的吸附点位。 硅胶吸附剂： 第二节 柱色谱法 吸