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细胞遗传学实验室诊断技术简介 概 念 细胞遗传学实验室诊断是通过组织细胞培养进行传统染色体分析的过程，是对染色体病及肿瘤进行诊断的主要方法。由于只能从具有分裂能力的细胞中得到染色体，但不是所以组织标本中都有足量的具有分裂能力的细胞，所以，细胞培养是细胞遗传学诊断的关键步骤。 基本概念 染色质是由DNA，组蛋白，非组蛋白和少量RNA组成的线性复合结构。在间期细胞核内能被碱性染料着色。染色体是细胞在有丝分裂或减数分裂过程中，染色质聚缩而成的麻花棒状结构。 染色体是细胞分裂时出现的一种重要的形态结构，是遗传物质的载体，其结构和数目的完整性对维持正常代谢活动和繁衍后代非常重要。 具有分裂能力的细胞：即有核的活细胞 实验室常用的具有分裂能力的细胞 外周血淋巴细胞 骨髓细胞 羊水细胞 绒毛膜细胞 实质性活检组织细胞：如皮肤成纤维细胞 癌细胞 进入母体循环的胎儿淋巴细胞 (1/5 000-1/20 000) 细胞培养的优势 为细胞遗传诊断提供分裂中期细胞以进行染色体核型分析； 为生化或分子遗传诊断提供足够量的细胞； 制作特殊细胞系并将其长期冷藏保存 细胞遗传学诊断实验室流水图 一、标本的收集和处理 外周血的收集和处理： 酒精灯下无菌操作 无菌肝素锂、钠抗凝管采血3~5ml 即刻颠倒混匀3~5次 保存：室温或4℃冰箱 注：1、尽管血中淋巴细胞可在抽血后数天内保存活力，但为了保证细胞培 养的质量， 均要求标本在抽血后24h内接种处理。 2、凝固后的血培养成功机会甚微，故实验室应拒绝接收已凝固的血标本。 骨髓的收集和处理 与外周血基本相同 骨髓中有丰富的可自我分裂的原始细胞，培养时不需使用分裂素来刺激细胞生长分裂，符合血液肿瘤细胞遗传诊断的要求。 一旦标本到达诊断实验室，必须立即作种植培养处理，以避免具有自我分裂能力的细胞死亡。 应该设法收集最初吸出的骨髓，因为其中含活力细胞最多。 羊水的收集 临床大夫B超定点，无菌操作，将先抽出2ml羊水丢弃（防止母体细胞污染），再换用20 ml无菌注射器抽取羊水20ml，抽取出的羊水应为清亮透明呈淡黄色。即刻送检培养。 生物安全柜内无菌操作，将羊水注入无菌离心管中，离心分离细胞（1500rpm8分钟），弃上清留0.5~1ml，将沉淀细胞吹打混匀，制成细胞悬液。 将混匀的羊水细胞悬液平均接种入50ml细胞培养瓶（规格为25cm2的聚苯乙烯培养瓶）中，每瓶加入5ml羊水完全培养液（GIBCO AmnioMAX-Ⅱ培养液），每份羊水标本接种2瓶。 5~7天后观察细胞生长情况 染色体的制备 方法学及原理：染色体显带技术 一、G显带法（G banding） 目前实验室使用最广泛的一种显带方法 原理：各条染色体上不同的区域含不同比例的A-T/G-C碱基。 经过胰蛋白酶消化处理后，染色体里的DNA暴露。由于Giemsa染料对A-T碱基的亲和比对G-C碱基强，从而使得染色体呈现恒定的深浅不一的条纹。本技术根据 Giemsa的第一个字母命名为G带。 特点：操作简单，普通显微镜下即可观察深带浅带，带纹清晰，标本可长期保存，稳定性和重复性好. 人类G显带染色体模式图 G带核型 二、Q显带法（Q banding） Q带是最先发表最早使用的显带方法 使用芥子奎吖因和二盐酸奎吖因等荧光染料产生的荧光带型，即Q显带方法，显出Q带。 在荧光显微镜下，可见染色体臂上有明暗相间的横纹。Q带的亮带对应G带的深带，暗带对应G带的浅带。 三、R带或称反带（reverse banding） 四、C显带法(C banding) 用途： C带技术通常用以检测着丝粒区、次缢痕区及Y染色体结构上的变化，还可评估细小而来源不明的标志染体的临床意义，临床实验室常用于观察1、9、16号染色体的次縊痕及Y染色体长臂远端区段, C带均呈深染状态。染色区域的大小在不同个体间差异很大。 C显带核型图 五、高级分辨显带技术 （一）高分辨带： 方法：使培养中的细胞同步化或去同步化，再通过短时间的秋水仙素处理，以得到后早期或早中期细胞分裂相。得到的染色体带水平可高达800~1400条。 用途：诊断微小的结构性染色体畸变 （二）Ag-NOR染色技术（即银染） 相关知识链接 染色体的多态性 定义：不同个体之间的染色体结构和染色的着色强度都存在着很队当属非病理性的细小差别，称为染色体的多态性。到目前为止，还没有发现染色体多态性能导致有害的遗传性状。 分类：按孟德尔方式从亲代向子代传 递，主要分为三种 1、倒位结构多态性：如 2、染色多态性：如异染色质区域 3、隨体多态性：不同个体的近端着丝粒染色 体的隨体数量