基因工程操作PPT.ppt

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基因工程操作PPT

1.2 基因工程的基本操作程序;;一、目的基因的获取;1、从基因文库中获取目的基因;;;;1.下列关于基因结构的认识中,正确的是 ( ) A.大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列 B.乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子 C.大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的下游 D.水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列 2.(多选)原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是 ( ) A.编码区都有能编码蛋白质的序列 B.编码区都是连续的 C.非编码区都能调控遗传信息的表达 D.非编码区都有RNA聚合酶结合的位点;提取某种生物的全部DNA;提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA;mRNA; 真核生物的基因用逆转录法得到的cDNA与原基因相同吗?有哪些差异?原核生物基因呢?;;;基因组DNA文库;基因组DNA文库与cDNA文库的比较;(3)构建基因文库的目的;依据:目的基因的有关信息。 如:根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性;构建基因组DNA文库时,首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA ;2、利用PCR技术扩增目的基因;PCR技术;过程:;③过程:;;蛋白质的氨基酸序列;一、目的基因的获取;1、基因表达载体的作用;(1)用一定的_________切割质粒,使其出现一个切口,露出____________。 (2)用___________切断目 的基因,使其产生_____ ____________。;质粒;Hin d限制酶;选择带两个标记基因的质粒有什么目的?;2.基因表达载体的组成:;①载体与表达载体的区别:二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。 ②启动子、终止子:对于目的基因表达必不可少。 ③目的基因不能单独进入受体细胞,必需以表达载体的方式携带进去。 ④基因表达载体的构建不可能是千篇一律的;常用的受体细胞:;1、将目的基因导入植物细胞;(2)基因枪法;(2)基因枪法——微弹轰击法;胚珠;(3)花粉管通道法;2、将目的基因导入动物细胞;3、将目的基因导入微生物细胞;小结:将目的基因导入受体细胞;;(一)、检测(分子水平);;(二)、鉴定(个体生物学水平);小结:目的基因的检测与鉴定;2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥;3、 在基因工程中,把选出的一个目的基因(共1000个脱氧核苷酸对,其中腺嘌岭脱氧核苷酸是460个)放入DNA扩增仪中扩增4次,那么,在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是( )个;加热至95摄氏度的目的是使DNA中的 断裂,这一过程在细胞内是通过 解旋酶 的作用来完成的。 当温度降低时,引物与模板末端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最后合成2个DNA分子,此过程中的原料 ,遵循的原则是 。 Taq酶的特点是( ) A.耐强酸 B.耐强碱 C.耐高温 D.最适温度37摄氏度 4.请指出PCR技术与DNA复制过程的区别 ;在遗传工程中,若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG/TACAC,要使其数量增多,可用PCR技术进行人工复制,复制时应给予的条件是 ①双链DNA分子为模板 ②ATGTG或TACAC模板链 ③四种脱氧核苷酸 ④四种核苷酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物 ⑧温度变化 ⑨恒温 A.①③④⑦⑧⑨ B.①②④⑥⑦⑧ C.①②⑤⑥⑦ D.①③⑥⑦⑧;在已知序列信息的情况下,获取目的基因的最方便方法是 A、化学合成法? ? B、基因组文库法 C、cDNA文库法?? D、聚合酶链反应; 目的基因与运载体结合所需的条件有 ①同一种限制酶 ②具有抗性基因的质粒 ③RNA聚合酶 ④目的基因 ⑤DNA连接酶 ⑥四种脱氧核苷酸 ⑦ATP A.①②③④⑤⑥⑦ B.①②④⑤⑥⑦ C.①②③④⑤ D.①②④⑤⑦;下列关于基因表达载体的叙述不正确的是 A.

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