基因工程药物的制造PPT.ppt

第二章 基因工程制药 　 DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。 回顾：基因工程的基础知识 一、基因的概念: 二、基因工程技术 是将目的基因插入载体，拼接、转入新的宿主细胞，构建成工程菌(或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。 第二节 基因工程药物生产的基本过程（掌握） ⒈目的基因的克隆 ⒉构建DNA重组体 ⒊DNA重组体转入宿主菌 ⒋构建工程菌 ⒌工程菌发酵 ⒍表达产物的分离纯化 ⒎产品的检验等 基因工程药物制药的主要程序 上游阶段： 下游阶段： 一 目的基因的获得 一、反转录法 反转录法就是分离纯化目的基因的RNA，再反转录成 cDNA，然后进行cDNA克隆表达。 二 、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR） RT-PCR是将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起，该法是mRNA经反转录合成cDNA第一链，在以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始协助下，PCR扩增，特异性的合成目的cDNA链（目的基因）。 三、化学合成法 合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷酸短片段，再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段，然后将这些双链片段按正确的次序进行退火连接成较长的DNA片段，再用连接酶连接成完整的基因。 问题： 来源于真核细胞的产生基因工程药物的目的基因，为什么不能进行直接分离？ 基因表达是指结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。 二 基因的表达 克隆载体 表达载体 受体细胞（菌） 表达系统： 基因工程中用来获得有功能的异源蛋白质的体系 常用表达载体 -- 质粒pBV220的结构 * * 结构基因：决定蛋白质(包括酶)分子一级结构的一段核苷酸顺序。一种结构基因对应于一种蛋白质分子。