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乙型肝炎病毒相关检验指标研究进展 　　【中图分类号】R512.605 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2012)06-0154-02 　　乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)属正嗜肝DNA病毒，其基因组DNA为松弛环状DNA(relayed circular DNA，rcDNA)，进入肝细胞核后转换为共价闭合环状DNA(covalenly closed circular DNA，cccDNA)。HBV cccDNA是信使RNA(messenger RNA，mRNA)和前基因组RNA(pregenome RNA，pgRNA)合成的模板，在整个自然病程中持续存在[1]。人们被HVB感染引起的乙型肝炎(简称乙肝)是发病率最高的传染病之一。目前经过献血员筛查和疫苗接种等预防措施在一定程度上能够降低乙肝发病率，但现在全世界仍有3亿HBV感染者。现对HBV相关检验指标进行总结如下： 　　1 HBV DNA 　　1.1 HBV DNA的特性:HBV DNA是HBV存在及复制的标志，对协助临床诊断HBV感染现状以及抗病毒治疗疗效观察等均有重要的意义。以前HBV DNA和DNA-P(具逆转录活性的DNA多聚酶)检测在临床应用十分广泛，现在已完全被更敏感、快速的聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)所代替[2]。 　　1.2 HBV DNA的检查方法:二十世纪80～90年，PCR技术因其敏感、特异、快速而得以广泛应用。传统的PCR产物检测采用电泳法，电泳过程中溴化乙啶插入双链DNA，经紫外光激发产生荧光，DNA含量为1ng时即可检出。定性PCA的敏感度则提高至10fg/mL，为前者的100倍；现在应用的抗病毒药物如核苷类似物α-IFN能够有效抑制外周血液中的HBV DNA，但对细胞核内cccDNA的影响极小[3]。李军等[4]报导应用以SYBR Green荧光染料和β-Globin作为样本细胞参照所建立的实时荧光定量PCR检测对肝细胞内HBV cccDNA具有较高的特异性、敏感性，且成本较低。总上所术，目前实时定量PCA是临床检测血清HBV DNA常用的分子生物学方法。其原理是充分利用Taqman酶独特的生物学活性和荧光激发、淬灭性质，分别合成携有荧光基因和淬灭基团的近距引物和探针。在循环进行中同样可检测荧光强度并用软件与内参比较进行定量分析。 　　2 HbeAg 　　2.1 HbeAg的组成及特性:HBeAg由前C区和C区共同编码，在启动前C区起始密码翻译后切割引导肽和C区C末端部分多肽后分泌进入血液成为HbeAg。前C区G1896→A变异导致产生终止密码TAG，以至HBeAg缺如；前C区C区启动子A1762→T和G1764→A的双变异，使得前C区mRNA产生减少，也会使HBeAg分泌减少。 　　2.2 HbeAg的检测:HBeAg阳性程度和滴度大小与HBV复制及传染性强弱呈正相关，但前C区或C区发生启动子／终止密码突变时，可表现为HBeAg阴性。这些HBV变异株与重型肝炎或慢性肝炎恶化有关。故而HBeAg阴性或HBeAb持续阳性的乙肝患者，需检测前S1(Pre-S1)或前S2(Pre-S2)抗原，以了解HBV复制程度。总之，HBV DNA全基因克隆、测序工作的完成为免疫和分子生物学检测奠定了基础，所以仅以HBeAg作为判断HBV复制活跃与否的指标是不够的[11]。 　　3 Pre-S1、Pre-S2抗原 　　3.1 Pre-S1、Pre-S2抗原的种类与结构:HBeAg包括前s（Pre-S)、Pre-S1和Pre-S2共3种蛋白，分别由s区、pre-S1区pre-S2区编码。Pre-S1由108～110个氨基酸残基组成，其21～47位氨基酸为肝细胞膜受体。Pre-S2含55个氨基酸残基，其C端与HBsAg的N端相连，而N端109～133位氨基酸为聚合人血清蛋白受体[5]。 　　3.2 Pre-S1、Pre-S2抗原的表达:多项研究发现Pre-S1与HBV DNA水平高度相关，是十分重要的病毒复制指标。有研究以探针原位杂交技术检测了慢性乙肝患者肝组织内HBV DNA与肝细胞内HbsAg、HbcAg、Pre-S1和Pre-S2，结果显示Pre-S1和Pre-S2的表达主要位于肝细胞胞浆内，部分位于胞膜上；Pre-S1阳性率高达75%，显著高于Pre-S2的35%[6]。更重要的是，Pre-S1的表达与HBV DNA及HBcAg的表达相平行，证实Pre-S1可能主要在HBV复制阶段表达[7]。Pre-S2较S蛋白具有更强的免疫原性，能提高机体对S蛋白的免疫反应，诱导产生中和抗体和保护性免疫反应，在保护机体免受HBV感染中可能有重要作用。Pre-S1、Pre-S2的持续存