LCMSMS法同时快速分析人血浆中种通脉颗粒多酚成分.docxVIP

中华中医药学会第七次中药分析学术交流会论文集表5银荷降脂方中5种成分非房室模型药动学参数(n=6)!生墨婪￡垒2塾婴璺璺旦堑望堕i堕趔璺!曼堕旦!!i!皇塑坐匹塑坐垡!堂皇!i垫g垄i垡皇!Q堕!塑成分(compounds)Dose／mg·kg一1C胍(ng·mL。1)乙∞“h)TI／-Ah)AUCo-T(ng·h·mL‘1)MRTo-T(h)4．讨论本研究采用LC．MS／MS法同时测定大鼠灌胃银荷降脂方后血浆中荷叶碱、去甲氧基姜黄素、 金丝桃苷、芹菜素、槲皮素的浓度，该方法分析速度快，专属性好，灵敏度高，操作简便。血浆样品的处理比较了甲醇沉淀、乙腈沉淀和乙酸乙酯萃取三种方法，但甲醇和乙腈沉蛋白的提取回收率均不理想，而乙酸乙酯萃取样品的回收率相对较高，故最终选用乙酸乙酯萃取作为样品的前处理方 法。测定成分中荷叶碱、金丝桃苷、去甲氧基姜黄素在正离子模式下响应较好，而槲皮素、芹菜素 在负离子模式下响应较好，因此须选用两种离子模式测定；所选的苯海拉明、氯霉素两种内标物分 别在正、负离子模式下有很好的响应，且为非内源性物质，回收率稳定，出峰时间适合。大鼠灌胃银荷降脂方后主要活性成分荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素、槲皮素的 药动学结果显示，荷叶碱的tl小MRTo．T比其它四种成分短，说明荷叶碱在大鼠血浆中消除相对较快，文献p峙艮道，荷叶碱在口服吸收后很快分布于组织中，并在各组织中均能检测到，这可能是荷叶碱大鼠血浆中消除快的原因。去甲氧基姜黄素与姜黄素结构上存在一些差异，文献【6】报道，大鼠灌胃姜黄素后的c。。／D为47．5g·L～，AUCo．。／D为326．57h·g·L～，本文结果显示去甲氧基姜黄素的Cm觚／D为1．6lg·L～，AUCo．。／D为5．86h．．-．gL～，与姜黄素相比明显偏低。这与两者的结构差异有关外还与方中的共存成分有关，有待进一步研究。银荷降脂方灌胃液中金丝桃苷含量是槲皮素的5倍多，但大鼠血浆中金丝桃苷的C。。。／D及 AUCo_t／D，比槲皮素低。艾副7J等研究发现，大鼠灌胃给予金丝桃苷后，血液中检测出槲皮素；JingYangIs]等在人体肠道细菌对金丝桃苷代谢研究中亦发现槲皮素是金丝桃苷的代谢产物之一。因此认为，虽然灌胃液中的金丝桃苷含量高于槲皮素，但经灌胃后金丝桃苷经肠道菌与体内代谢，导致金丝桃苷的C。戤／D及AUCo一。／D低于槲皮素的结果。本实验建立了血浆中荷叶碱、去甲氧基姜黄素、金丝桃苷、芹菜素、槲皮素的LC—MS／MS定 量分析方法，初步阐明5种成分的药动学特征，为临床应用及新药开发提供依据。参考文献(略)LC-MS／MS法同时快速分析人血浆中15种通脉颗粒多酚成分张颖1，刘春旭-～，杨秀伟，，刘建勋1 1中国中医科学院西苑医院，2沈阳药科大学中药学院生药学教研室。3北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室摘要目的：通脉颗粒是由丹参、川芎、葛根3味中药组方，临床上对缺血性心脑血管疾病、动脉硬化、脑血栓、冠 心病、心绞痛等有较好疗效。为研究通脉颗在人体内吸收成分及临床药代动力学特征。建立了测定通脉颗粒在人血浆中多酚类药效成分的快速、灵敏生物分析方法方法：以盐酸酸化．乙酸乙酯与甲醇混合液萃取法处理血浆样品。在APl4000QTRAPLS-MS／MS系统下，采用MerckRP-18e50mmx2mm整体反相硅胶色谱柱分离，以A：甲醇．乙腈l：l(O．1％甲酸)和B：0．1％甲酸水梯度洗脱程序实现快速分离，ESI源，负离子模式下以MRM(多离子反应监控 方式)同时分析人血浆样品中15种多酚类通脉颗粒的药物成分。鲒果：在建立的血浆样品提取和LC-MS／MS分析309中华中医药学会第七次中药分析学术交流会论文集条件下。可在8．5min内完成人血降中15种通脉颗粒多酚成分的快速分析。对方法学的验证结果表明。内源性成分 均不干扰待测成分的分析，基质效应在15％范围内。15种成分线性良好，相关系数均在O．99以上，最低检测限可 达0．25ng／ml。该分析方法下15种成分的精密度准确度和稳定性均符合药代研究对生物分析方法的要求。结论：所建立的通脉颗粒血药成分分析方法，特异、准确、精密、快速，．--j-$于通脉颗粒药临床药代血浆样本的分析。关键词通脉颗粒：药代动力学：LC．MS／MS：多酚；血浆通脉颗粒(通脉颗粒冲剂)收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂(第四册)，其处方组成为： 丹参、川芎、葛根以l：l：1的比例组方而成，具有活血通脉的功效，临床上对于缺血性心脑血管疾病，动脉硬化，脑血栓，脑缺血，冠心病，心绞痛等有较好的疗效。通脉颗粒中药昧的化学研究及药理研究表明，多酚类成分是主要的心血管活性成分。以葛根 素为代表的异黄酮类是葛根中的主要成分，具有多种心血管药理活性【卜31。酚酸类成分则是丹参中的主要成分，