[教育]凝胶渗透色谱GPC在蛋白质分子检测方面的应用.ppt

因此，粘度过小或者过大都不利于施胶，会导致大豆蛋白改性胶粘接性能的下降。 本实验测得的蛋白改性胶蛋白分子量的范围在3000-160000之间，符合中密度纤维板的粘接要求。同时，为今后大豆蛋白的改性程度提供了参考，也为生产实践中提供较好的粘接性能的蛋白胶粘剂提供了理论依据。 * GPC在蛋白质分子量分布检测上的应用 成 员：赵百添 陈小芳 乔 莉 苏 晴 指导老师：陆 茵 日 期：2012. 11. 12 GPC的定义及基本原理 1 GPC仪的基本结构 2 3 4 GPC法的优缺点 GPC法测定蛋白质分子量的分析 CONTENTS 凝胶渗透色谱（Gel Permeation Chromatography， 简称GPC）也称为体积排除色谱（Size Exclusion Chr- omatography,简称SEC），是一种液相色谱。和其他类 型的色谱一样，GPC/SEC的基本作用也是分离，其分离 对象是同一聚合物具有不同分子量的高分子组份。 凝胶渗透色谱（GPC）的基本原理是将高分子溶液通过一根装填有凝胶的柱子，在柱子中按分子大小进行分离。 柱子为玻璃柱或者金属柱，柱内装填有交联度很高的球形凝胶。凝胶的种类有很多，需要根据具体的要求确定（常用的是聚苯乙烯凝胶）。然而无论哪一种填料，它们都有一个共同点，就是球形凝胶体本身都有很多按一定规律分布的大小不同的空洞。 尺寸不同的高聚物分子，按其分子大小能自由地渗透进和渗透出这些凝胶孔洞。 凝胶孔洞与分子尺寸是相适应的，当被分析的试样随着淋洗溶剂进入柱子后，溶质分子即向填料内部孔洞扩散。较大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多。 经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开， 相对分子质量大的在前面（即淋洗时间短），相对分子质量 小的在后面（即淋洗时间长）。然后再用一定的方法检知每 级中溶质的浓度和分子量。 自试样进柱到被淋洗出来，所接受到的淋出液总体积称为 该试样的淋出体积。 当仪器和实验条件确定后，溶质的淋出 体积与其分子量有关，分子量愈大，其淋出体积愈小。 因此，大分子比起小分子来说，在柱中的行程就短得多。 孔穴 填充物颗粒 大 中 小 样品 泵系统、（自动）进样系统、凝胶色谱柱、检测系统和数据采集与处理系统。 泵系统： 包括一个溶剂储存器、一套脱气装置和一个高压泵。它的工作是使流动相（溶剂）以恒定的流速流入色谱柱。泵的工作状况好坏直接影响着最终数据的准确性。越是精密的仪器，要求泵的工作状态越稳定。要求流量的误差应该低于0.01mL/min。 色谱柱： GPC仪分离的核心部件。是在一根不锈钢空心细管中加入孔径不同的微粒作为填料。 填料（根据所使用的溶剂选择填料，对填料最基本的要求是填料不能被溶剂溶解）：交联聚苯乙烯凝胶（适用于有机溶剂，可耐高温）、交联聚乙酸乙烯酯凝胶（最高100℃，适用于乙醇、丙酮一类极性溶剂）多孔硅球（适用于水和有机溶剂）、多孔玻璃、多孔氧化铝（适用于水和有机溶剂） 优点 操作简便快捷 进样量小 数据可靠且重现性好 自动化程度高等 排阻极限 排阻极限是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量。所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗脱出来。排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子量，大于这种凝胶的排阻极限的分子用这种凝胶不能得到分离。随固定相不同，排阻极限范围约在 400至60×106之间。 渗透极限 能够完全进入凝胶颗粒孔穴内部的最大分子的分子量。 在选择固定相时，应使欲分离样品粒子的 相对分子质量落在固定相的渗透极限和排阻极 限之间。 对于单分散相的高聚物样品，其色谱的保留值（在凝胶色谱中称为峰位值）即表征了样品的分子量。一般这种单分散性的色谱曲线可以用高斯分布函数表示： 式中，V为淋洗体积；Vp为色谱峰的峰位淋洗体积；W(V)为样品的质量函数；W0为样品质量；σ为标准偏差。 对于多分散性样品，其凝胶色谱曲线是许多单分散性样品 分布曲线的叠加，如下图所 示。曲线下面的面积正比与 样品量，是各单分散性样品