TALENandCRISPRPPT课件.pptx

北京唯尚立德生物技术有限公司;北京唯尚立德生物科技有限公司;Background Transcription activator-like (TAL) effector CRISPR/Cas9 High-Thought Screening by siRNA Discussion;无论研究什么生物现象， 都需要做一件事：改变基因 1） Loss function：降低基因或删除基因 Give function: 提高基因的表达 在逻辑上，从必要性和充分性方面阐明基因功能;生物学家的梦想：随心所欲地操作基因 ;TALE的发现并迅速成为科技最前沿;TALE的主要两个应用;TALEN-神奇的基因剪刀;Double Strand Breaks (DSB) Repair（DNA双链断裂）细胞内的DNA损失修复方式： ;细胞内基因组DNA被TALEN剪切后，诱发DNA损伤修复机制。细胞可以通过NHEJ（Non-homologous End Joining）修复DNA，在此修过程中或多或少地删除或插入了一定数目的碱基，造成移码，形成目标基因敲除突变体。 TALEN敲除基因的效率大约为20%，从1%-30%。 最好的TALEN达50% ;用于同源重组的TALEN：提高同???重组100-1000 倍;TALEN的应用： 模式生物的基因敲除;TALEN的应用： 模式生物的基因敲除-Rat 基因敲除;TALEN的应用：人类IPS干细胞的基因修饰;TALEN的应用： HIV的治疗-唯尚立德合作例子1;TALEN的应用： 无痕的植物基因敲除;TALEN的应用： 无痕的植物基因敲除;TALEN的应用： 水稻基因敲除-抗病水稻;TALEN的应用： 水稻基因敲除-抗病水稻;TALEN的应用： Genes KO in rice and Brachypodium;Gene Name;将识别特异DNA序列的TALE与转录激活因子VP64 融合，表达的融合蛋白结合启动子附近的特异DNA序列， 并通过VP64激活区域与Pol II 结合，激活基因的转录，提高了内源目标基因的表达。;TALEA-人工转录因子;TALEA-人工转录因子-植物基因的激活;癌细胞迁移相关基因的筛选-北京大学席建忠教授;唯尚立德的合作伙伴-例子2;TALE应用展望-TALEX;TALE常见组装技术;唯尚立德的大规模TALE制备技术;唯尚立德的TALEN合成时间表 －Timeline;唯尚立德的TALEN活性检测方法;唯尚立德的TALEN活性检测方法;唯尚立德设计TALEN的活性;唯尚立德设计TALEN的活性;Cat基因的TALEN与靶点: TALEN Cat-L1: T GCCTAACCAATGGAGC AAACAATGTATAGTGTCTAG ATGGCTTTGGAAAGCA A Cat-L2: T AACCAATGGAGCAAAC AATGTATAGTGTCTAG ATGGCTTTGGAAAGCA A 报道质粒靶点DNA序列 LUC-WT reporter :TTGCCTAACCAATGGAGCAAACAATGTATAGTGTCTAGATGGCTTTGGAAAGCAAT LUC-Mu reporter: TTGCCTAACCAATGGACCAAACAATGTATAGTGTCTAGATGGCTTTGGAAAGCAAT;Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/Cas9是细菌和古细菌一种不断进化适应的免疫防御机制。CRISPR/Cas9利用一段小 RNA 来识别并进行有效的靶向DNA剪切。;Cas9-工作原理 ;Church, 2013, Science;Cas9/gRNA induces indels in the etsrp locus in zebrafish ;Cas9/gRNA induces indels in the etsrp locus in zebrafish ;Cas9/gRNA induces indels in the gata5 locus in zebrafish. ;Specificity and Off-target;为什么选唯尚立德？;目前全国已有250家以上实验室是唯尚立德的客户和合作伙伴 人类癌细胞迁移基因敲除和激活： 北京大学医学部和北京大学 猪的基因敲除及基因修饰： 中科院 斑马鱼的基因敲除：浙江大学，香港科技大学，南方医科大学….. 家蚕的基因敲除：家蚕国家重点实验室 水稻的基因敲除： 农科院 玉米基因敲除： 农科院 IPS干细胞及血液干细胞基因敲除和激活： 清华大学 HIV的治疗： 清华大学 T