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TLC法 （四） HPLC法 （五） P198实例解析 三、 检查 有关物质 （一） HPLC法（2010版） 吸收度 （二） 四、 含量测定 ChP、USP HPLC法（外标法） 系统适用性试验 1. 防护柱 2. 预试溶液 4-差向脱水四环素 四环素 3. RSD≤2.0% 坂口反应 N-甲基葡萄 糖胺反应 麦芽酚反应 水解产物 UV 4. 链霉素在230nm处有紫外吸收 庆大霉素无紫外吸收 二、 鉴别试验 茚三酮反应 （一） △ 硫酸庆大霉素的鉴别： 取本品约5mg，加水1ml溶解后，加0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml与吡啶0.5ml，在水浴中加热5分钟，即呈紫蓝色 链霉胍特有反应 （或α-萘酚） 坂口反应 （二） 方法：取本品0.5mg，加水4ml溶解，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1%8-羟基喹啉的乙醇溶液1ml，放冷至15℃，加次溴酸钠试液3滴，即显橙红色 麦芽酚反应 麦芽酚反应 （三） 链霉糖特有反应 麦芽酚反应 （三） 链霉糖特有反应 H+ 分子重排 硫酸链霉素的反应： 取本品约20mg，加水5ml溶解后，加氢氧化钠溶液0.3ml，置水浴上加热5分钟，加硫酸铁铵溶液0.5ml，即显紫红色 N-甲基葡萄糖胺反应 （四） 乙酰丙酮 OH- 吡咯衍生物 对二甲氨基苯甲醛 H+ 红色 （五） 硫酸盐的鉴别反应 H+ TLC法 （六） P195：硫酸庆大霉素的鉴别 三、 特殊杂质检查及组分分析 链霉素杂质 链霉素B（水解后为甘露糖、链霉素） 3. 方法 TLC中的对照品法 来源 反应中间体 特点 活性仅为链霉素的20%-25% 薄层色谱法检查链霉素B 取本品0.25g，精密称定，置回流瓶中，加5ml新鲜配制的硫酸-甲醇溶液溶解，加热回流1小时，冷却，用甲醇冲洗冷凝管，合并冲洗液，并用甲醇定量稀释成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液。 薄层色谱法检查链霉素B 精密称取甘露糖对照品36mg，置回流瓶中，同法处理后定量制成每1ml中含72ug的溶液，作为对照溶液 取上述溶液，点于同一薄层板上，展开，晾干，显色 供试品溶液所显链霉素B斑点的颜色与对照溶液主斑点比较，不得更深 四、含量测定 微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。 第四节 四环素类抗生素 A B C D 四并苯或萘并萘 结构特点： 二甲氨基、酰胺基、酚羟基 酮基和烯醇基的共轭双键结构 金霉素 (CTC) chlortetracycline 氯四环素 土霉素 (OTC) oxytetracycline 氧四环素 多西环素 (DOTC) doxycycline 脱氧土霉素 美他环素（METC） metacycline （二） 性质 酸碱性 1. 与酸、碱均能成盐 强酸或强碱中溶解度↑ 临床常用其盐酸盐 酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性 二甲胺基 弱碱性 2.溶解性和引湿性 pH4.5-7.2，难溶于水 pH低于4或高于8，溶解度增大 具引湿性，含有结晶水 3.旋光性 用于定性或定量 4.紫外吸收和荧光性质 土霉素的酸性溶液在353nm处的百分吸光系数为270-290 多西环素酸性甲醇溶液在349nm处的百分吸光系数为325-363 在紫外光照射下产生荧光，降解产物也具有荧光 5、不稳定性 差向异构化反应：pH2-6 酸性条件下降解：脱水 碱性条件下降解：C环打开 对各种氧化剂、酸、碱都不稳定。干燥避光较稳定。 淡黄→黑 蓝色荧光 （1）差向异构化 差向四环素 （土霉素、多西环素不易差向异构化） （2）酸性条件下的降解 λmax = 445nm λmax = 435nm 橙黄色 脱水四环素 （3）碱性条件下的降解 无活性，具有内酯结构，在紫外光照射下 有强烈荧光 与金属离子生成有色配位化合物 Zn2+ Cu2+ Mg2+ Ce3+ Al3+ Zr4+ 与金属离子络合 6. 二、 鉴别试验 H2SO4反应 （一） FeCl3反应 （二） 荧光法 （三） UV 绿色荧光 H+ UV 4. β-内酰胺环的不稳定性 不稳定性因素 四元环张力大 酰胺键易水解 4. β-内酰胺环的不稳定性  稳定性与含水量和纯度密切相