《伯乐gm试验》ppt课件.ppt

伯乐gm实验 李丹 GM试验原理 GM试验的临床价值 GM试验假阳性的情况 GM试验假阴性的情况 GM试验的优势和局限 其他样本的gm实验 与其他厂家比较 GM试验检测的是半乳甘露聚糖（glactomannan，GM），主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断； 半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，菌细胞壁表面菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原； 本试剂盒采用ELISA夹心法，将EBA-2单克隆抗体包被于微孔内检测结合（结合物为过氧化物酶连接的抗体）到已激活微孔板上的抗体。加入EDTA的样本经过热处理(去除免疫复合物和沉淀可能干扰实验的血清蛋白质，加入微孔板中。如果样本中有半乳甘露聚糖抗原，则形成单克隆抗体-半乳甘露聚糖-单克隆抗体过氧化物酶复合物。洗板去除没有结合的物质加入TMB,显蓝色，加入2M硫酸终止反应，酶标仪读数。 1 伯乐GM试验的原理 严重粒细胞缺乏 免疫功能低下（恶性肿瘤、血液病、尿毒症、艾滋病、器官移植、糖尿病） 实体器官移植 入住ICU 血液肿瘤 骨髓移植 长期应用激素治疗 慢性阻塞性肺病 易感染人群 无菌、无热源采血管，ep管，枪头，移液器 金属浴加热模块，离心机支持1.5ml ep管，支持450nm和620/630nm双波长的酶标仪，水浴锅 必备耗材和仪器 曲霉细胞壁成分 菌丝在组织中生长释放 热稳定 可溶性:血清，纤支镜灌洗液，脑脊液 分子量：根据来源不同从10000到50000不等，属于高分子化合物 半乳甘露聚糖 ELISA指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。 ELISA分为夹心法、间接法和竞争法 夹心法常用于检测大分子抗原 间接法常用于检测抗体 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原 Elisa简介 将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体 加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结 洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结 洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结 洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果 夹心法操作原理 将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原 加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结 洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结 洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色 间接法操作原理 将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体 加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结 加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结 洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色 竞争法操作原理 GM可在患者临床症状出现前5-8d获得阳性结果 曲菌定植时极少释放入血，因此有助于鉴别侵袭与定植； GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度； 连续检测GM可作为治疗疗效的监测； 在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高； 参考值：I≥0.5为阳性。 2 血清GM试验的临床价值 使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦，阿莫西林/克拉维酸； 高剂量使用激素 化疗的严重黏膜炎患者谷类食物中的GM抗原通过肠道入血 新生儿和儿童（双歧杆菌定植、食用乳制品）； 血液透析； 自身免疫性肝炎等； 食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物。 交叉反应真菌：青霉、拟青霉、隐球菌、头状地霉、组织胞浆菌。 3 GM试验假阳性的情况 释放入血循环中的曲霉GM并不持续存在而是会很快清除； 以前使用了抗真菌药物 1.三唑类（降低GM水平） 2.米卡芬净类（升高GM水平） 病情不严重； 非粒细胞缺乏的患者。 4 GM试验假阴性的情况 优势： 鉴别曲霉菌侵袭性感染与定植； 早于临床症状和影像学异常5-8d； GM诊断侵袭性曲霉感染的敏感度高于G试验； 血清中存在时间较短，可作为疗效监测。 5 GM试验的优势和局限 局限： 阴性实验结果不能排除侵袭曲霉病的诊断。侵袭性曲霉病的高危病人，应当每周检测两次。 没有使用新生儿样本来评估曲霉菌抗原检测试剂盒的性能。 在慢性牙肿病（CGD）和Job’s综合征的患者中，检出率减低 在侵袭性曲霉病人中，如果采取积极的抗真菌治疗，可能导致曲霉抗原检测试剂盒的灵敏度降低 其他属的真菌如孢拟青霉，青霉，白地酶和组织胞浆有EBA-2单克隆抗体反应性 等许多因素引起的假阳性和假阴性 R5/R4大于等于1.5，R3/R4小于等于0.4 两个R4之间差距不大于0.2 结果判读 G试验和GM试验的联合