《体内药物分析z》ppt课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * 体内药物分析 * （四）生物样品中缀合物水解 1．酸水解 2．酶水解 β-葡萄糖醛酸苷酶 芳基硫酸酯酶 混合酶 pH4.5-7.0 37℃ 3．溶剂解 某些药物的硫酸酯，往往加入率取溶剂时发生分解，同时提取有机溶剂中 * 体内药物分析 * （五）生物样品的萃取 1．液-液萃取 （1）优点：①与杂质分离 ②简便 ③浓集 ④提取率高 （2）提取率：在有机相与水相中的溶解度的比值分配系数，一般少量多次，对生物样品一般一次萃取， 70%重现性 * 体内药物分析 * （3）影响提取率的因素 ① pH 碱性药物在碱性pH 酸性 酸性pH ② 提取溶剂 相似相溶原理 沸点低，不影响检测,性质稳定，不起化学反应 ③ 离子强度 加入中性盐 增加离子强度，与水结合强，便于有机溶剂提取 * 体内药物分析 * （4）离子对提取 对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采用离子对提取 ①原理 ②应用 阴离子：COOH+ SO3H- 反离子 四丁基铵 阳离子：NH2+ 反离子烷基或芳基磺酸盐 （5）提取技术 一般在试管中进行,有机相与水相比1:1或2:1 * 体内药物分析 * （6）乳化问题 措施 ①轻缓振摇 ②含有分散度大或不溶物应过滤掉 ③避免在高pH条件下，从水中提取药物 ④避免使用易发生乳化的溶剂 ⑤萃取剂水中加入少量NaCl * 体内药物分析 * 破乳方法 ①机械法 ②加入少量高级脂肪醇 改变表面张力 ③改善混合溶剂比例，增加分散相分数 （7）药物的吸附 ①玻璃容器吸附 1%三甲一氯硅烷 10%二甲二氯硅烷 ②血浆 * 体内药物分析 * 2．液固萃取 固相萃取[solid phase extraction SPE] 针管式 抽空减压 加压 过滤 * 体内药物分析 * （1）固相萃取步骤 ①固相选择 样品1ml 1ml规格固相 1~25ml 3ml规格固相 ②固相处理 反相C18 固定相的6~10倍体积甲醇洗柱，使溶剂化； 6~10倍水缓冲服液冲洗达分离状态 ③上样 ④分离 用适当的弱溶剂洗涤 洗去杂质，通N2干燥固相 ⑤洗脱待测物 改变pH或极性 * 体内药物分析 * （2）影响固相萃取的因素 ① 流速 流速快，按触不充分，样品流失 回收率低 柱处理 5~10ml·min-1 洗脱 0.2~1ml·min-1（〈300mg〉 2~5ml·min-1（300mg） ② 装样 过载 突破性试验 已知浓度样品液 小体积上柱→洗脱回收百分率 加大体积→洗脱回收百分率 绘图 当回收率下降时为过载 * 体内药物分析 * （六）生物样品的组分浓集 （七） 衍生化处理 GC衍生化 HPLC衍生化 * 体内药物分析 * 第四节 体内药物分析方法的建立与评价 一、分析方法 灵敏度 专属性 光谱法 + + 刚开始应用较多双波长，导数 色谱法 +++ +++ HPLC GC 免疫法 ++++ ++ 免疫交叉反应，重现性差 根据药物理化性质，结构特征，药物浓度，干扰成分大小，实验目的 * 体内药物分析 * 二、分析方法的设计依据 方法的建立 原始方法改进→创新 创立方法 * 体内药物分析 * 1．做好文献总结 2．充分了解药物特征及体内状况 pH、亲脂性、溶解度、极性、光谱特征、药动学参数、体内代谢情况 3．明确测定目的、要求 目的 药浓监测 药代动力学研究 母体药物和代谢物 4．结合实验室条件 设备条件 预处理方法 * 体内药物分析 * 三、分析方法的建立 1．纯品进行测定 确定线性范围、灵敏度、反应条件（pH、t、T） 2．空白样品测定 确定空白样品是否有干扰 3．以水代替空白样品，加标准液后测定 了解提取率、检测浓度 确定萃取条件、pH、挥发浓缩等 4．空白样品加入标准液测定 标准曲线建立 回归方程 回收率 5．实验样品测定 * 体内药物分析 * 四、分析方法的评价 可行性和可靠性 1．准确度 accuracy 测定结果与真实性的差异 用回收率表示 ①接近100% ②相对恒定 * 体内药物分析 * ①绝对回收率 也称萃取回收率、提取回收率 测定血浆样品中药物浓度/相同浓度的