HIV艾滋病抗体实验室检测方法HIV上岗证培训.ppt

艾滋病抗体实验室检测方法 主要内容 HIV检测一般情况：窗口期、检测样本及流程 关于样本实验室操作：采集、处理、检测、转运 常用筛查方法 艾滋病检测意义 艾滋病： 影响人类健康的全球性灾难 我国艾滋病的流行形势也日趋严峻 据估算，我国大约只有10%艾滋病病毒感染者被发现，其余90%处于未知状态，这对相关的预防、治疗和关怀工作带来极大挑战 要找到尚未发现的感染者，实验室检测工作必不可少 感染HIV后的血清学变化 HIV RNA 浓度 抗体 感染 1周 2周 6周 12周 -年 窗口期 窗口期：机体感染HIV到能检出抗体之间的时期 第三代HIV抗体检测试剂盒能使大部分感染者在4-8周后检测出HIV抗体 如果到12周（即3个月）仍检测不出抗体，基本可以排除HIV感染，对抗体检测呈不确定反应或高危行为后高度怀疑有感染危险者，可再随访3个月后复检。必要时可做HIV-1 p24抗原或HIV核酸检测作为辅助诊断 检测样品： 血液、组织液、排泄物、组织、器官、精液以及有关血液制品、生物组织或其它物品等 进行艾滋病病毒HIV或其相应标志物的实验室测定，包括HIV分离、抗原检测、核酸检测和抗体检测等 目前用于HIV诊断的常规方法为血液中HIV抗体检测，我国目前检测血液中HIV抗体的常规检测程序分为筛查试验（包括初筛和复检）和确认试验 HIV抗体筛查实验流程图 样本 阳性反应 一阴一阳 阴性反应 筛查检测 均阳性反应 重复检测 均阴性反应 送确认实验室进行确认 阴性报告 筛查试剂 原有试剂加另外一种筛查试剂 设备要求 主要仪器设备包括 生物安全柜、离心机、酶标读数仪、洗板机、移液器、温箱/水浴箱、冰箱、高压蒸汽灭菌器 所用的仪器应该校准，每次使用后应做记录 为保证人员安全，实验室内的耗材最好使用塑料制品 标本要求 1．种类：血清或血浆(肝素、枸橼酸钠或EDTA抗凝)。 2．量： 静脉血2ml，常规分离血清或血浆。 3. 3000转／分离心10分钟。 4．保存：分离后7d之内测定的血清或血浆标本可放置于 2?8?C保存，超过7d在-20?C保存。 试剂要求 我国规定HIV抗体筛查试剂必须是： HIV-1/2混合型 经国家食品药品监督管理局注册批准 批批检合格 在有效期内 推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂 （） 常用筛查方法 目前，国内常用的HIV抗体筛查试验方法有： 酶联免疫吸附试验（ELISA） 颗粒凝集试验　（PA） 快速试验 双抗原夹心法原理 固相 包被抗原 待测抗体（IgG、IgM） 酶标记抗原 底物 试剂盒组成（双抗原夹心法ELISA） 1.HIV酶标板 2.HIV-1型阳性对照 3.HIV-2型阳性对照 4.HIV阴性对照 5.HIV酶标试剂 6.浓缩洗涤液 7.显色剂A液 8.显色剂B液 9.终止液 操作程序 - 1 阅读标准操作程序，严格按照试剂说明书操作 将试剂盒及样品放置在室温半小时以上 1）准备酶标板，小心撕去酶标板条上的封条 2）配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。 3）编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔、阳性对照1型,2型各1孔、空白1孔。 4）加样：分别在相应孔中加入加入100 μl待检样品及阴、阳性对照、外部质控对照。 操作程序 - 2 5）温育：用封板膜封板后置37±1℃温育60±1分钟。 6）洗涤：小心将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液洗涤5遍，拍干。 7）加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 8）温育：用封板膜封板后置37±1℃温育30±1分钟。 9)洗涤：小心将封板膜揭掉，使用洗板机吸干孔内液体，用洗涤液充分洗涤5遍，最后一次尽量拍干。 。 操作程序 - 3 10）显色：每孔加入显色剂A、B液各50μl，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37±1℃避光显色30±1分钟。 12）测定：每孔加终止液50μl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长检测，可不设空白），在15分钟内测定各孔OD值。 13）用酶标仪测定OD值，打印结果 实验结果判断（1） 检查阴性对照和阳性对照的OD值是否符合要求，判断本次实验是否成立，并计算cut off值 结果判定:1.阴性对照的正常范围： 正常情况下，阴性对照孔OD值≤0.10。2.阳性对照的正常范围： 正常情况下，阳性对照孔OD值≥0.80。3.临界值（CUTOFF）计算： 临界值=阴性对照孔OD均值Nc + 0.12。