临床检验免疫学 沉淀应、凝集反应.ppt

最适比方阵测定法 可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体相遇并且浓度比例适当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。 常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙烯酰胺凝胶。 免疫电泳技术 优点： 1.加快反应的速度。 2.提高了灵敏度。 　　3.增加了分辨率。 　　　 结果分析： 无沉淀线出现则表明无相应的抗原。 沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。 沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。 1.琼脂（无电渗或电渗很小的）影响火箭形状不规则。 2.电泳终点时间的确定。3.标本数量多时应先通电后加样,防止宽底峰形. 4.IgG定量时，可用甲醛与IgG上的氨基结合（甲酰化），抵消了电渗作用。 当可溶性抗原与相应抗体特异结合，二者比例合适时，在特殊的缓冲液中它们快速形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液体出现浊度。利用现代光学测量仪器对浊度进行测定从而检测抗原含量。 1.透射免疫比浊法 2.散射免疫比浊法 3.免疫胶乳比浊法 1.抗原抗体的比例：反应体系中保持抗体过量 2.抗体的质量 ：特异性强，效价高，亲和力　　　　　　　强并使用R型抗体 3.抗原抗体反应液的最适PH为6.5～8.5 4.使用增浊剂 1.主要用于血液、体液中蛋白质的测定。 2.优点：稳定性好，敏感度高，精确度高，简便快速，易于自动化，无放射性核素污染，适合大批量标本检测。3.对流免疫电泳与火箭免疫电泳技术由于电渗的缘故已不推荐使用。 4.免疫电泳扩散时间长，影响因素多，结果不易分析。 5.免疫固定电泳分辨力强，敏感度高，结果易于分析，常用于M蛋白的鉴定与分型。 1.什么是沉淀反应？有何特点？ 2.简述免疫浊度法的原理、方法与分类。 3.简述单向扩散试验的原理和应用。 4.简述免疫固定电泳的原理及临床应用价值。 5.何谓Mancini曲线？何谓Fahey曲线？ 6.影响免疫比浊测定的因素有哪些？ 7.抗原性质分析出现哪三种结果现象，结果解释？ 8.自动化免疫比浊法发展趋势和应用前景如何？ 沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出的沉淀现象.根据沉淀反应介质和检测方法的不同，将其分为液体内沉淀试验、凝胶内沉淀试验和凝胶免疫电泳试验三大基本类型。 免疫浊法度测定为液体内沉淀试验；单向扩散试验平板法是一种定量的凝胶内沉淀试验，免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物，常见的有对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、免疫固定电泳等。 凝集反应 一、直接凝集反应 二、 间接凝集反应 4.自身红细胞凝集试验 正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 间接凝集抑制试验 协同凝集试验 间接凝集反应的类型 用抗原致敏载体--检测抗体 1.正向间接凝集试验 2.反向间接凝集试验 用抗体致敏载体----检测抗原 3.间接凝集抑制试验 用抗原致敏载体--检测抗原 未经致敏的受检者新鲜红细胞 试剂：抗人O型红细胞的单克隆抗体 临床应用：HIV检测、HBV检测 自身红细胞凝集试验 SPA:SPA-IgG Fc; SPA抗体致敏------测抗原 补充：1.协同凝集试验 补充：2.间接血凝试验 血凝试验强度 补充：3.胶乳凝集试验 补充：4.明胶凝集试验 将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集 间接凝集反应的应用 1.抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。 2.抗体的检测 　　检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。 又称 Coombs试验 三、 抗球蛋白试验 （一）直接Coombs试验 不完全抗体 检测红细胞上抗体 （二）间接Coombs试验 检测血清中的抗红细胞抗体 临床应用： 在输血上的应用 血型抗原抗体的检查 对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断 对溶血性贫血的研究 对细菌或立克次体的不完全抗体检查 1．凝集反应的特点是什么？ 2．什么叫直接凝集反应，什么叫间接凝集反 应？它们之间有何异同？ 3．什么是直接Coombs? 什么是间接Coombs， 它们之间有何区别？ 4．叙述抗人球蛋白试验的类型及其原理？ 5．叙述抗人球蛋白试验的临床应用 6．凝集反应的优缺点是什么？ 7．凝集反应的发展趋势是什么？ 思考题 小结 凝集反应是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。 可以分为直接凝集反应和间接凝集反应。 在临床检验中最常用的为间接血凝试验、胶乳凝集试验和明胶试验。 抗球蛋白试验又称为Coombs试验，是