体内药物分析 手性药物PLC法.ppt

第10章 手性药物的 高效液相色谱拆分法 常用的有：牛血清蛋白（BSA）和人血α1-酸性糖蛋白(AGP)键合硅胶手性固定相 1952 年,Dalgliesh〔2〕采用纸层析研究氨基酸对映体的分离, 并提出了色谱直接拆分“三点作用”分离理论。近年来, P irk le 等〔3〕在深入研究手性固定相以及手性色谱立体识别机理的过程中, 发展了Dalgliesh 观点, 再一次阐述了“三点作用”分离理论: 手性识别要求手性固定相和对映异构体之间至少有3 个同时存在的作用力, 这些作用力中至少有1 个依赖于立体化学。即: 用其中的另一对映异构体(不作任何构象改变) 来替代后, 至少有1 个作用力不复存在或明显改变其性质(见图1)。 手性识别模型表达: 在手性固定相上有3 个作用点A、B、C, 与之作用的对映异构体也同样有3 个作用点A ’、B’、C’。对映体I 与CSP 形成A 2A ’、B2B’、C2C’3 个作用力, 对映体II 则不存在C2C’ 作用力。如果C2C’ 作用力使形成的非对映分子络合物稳定化, 那么, 色谱分离过程中对映体I 比II 滞后; 反之, 对映体I 由于C2C’ 的排斥作用先流出色谱柱。如果C2C’作用力很小, 则对映体I、II 不能被色谱拆分。 直接法可用 Dalgleish 于1952年提出的著名的“三点作用原理”［20］来解释：药物一个对映体先与手性固定相或流动相的添加剂间发生分子间的三点作用，同时另一对映体则发生二点作用，前者形成的分子复合物较后者稳定，用 HPLC 法依次使其对映体分离。 拮抗 jie第二声 因果关系对不？ 尽信书不如无书 大家已学过药理学，要用基本的原理、概念来分析问题，解决问题。 我本人不是药理专业的，而是生物化学专业的 估计丁黎li老师不是药理专业的 反应停引起的不良反应并不是药动学原因引起的：孕妇-镇静 胎儿—手脚发育障碍 两码事！蛋白信号传递系统 因而手性药物各对映体的药效学、药动学和毒理学可能存在很大的差异。 手性药物各对映体的物理化学性质相似(仅旋光性不同) , 拆分难度大。传统的拆分方法为非色谱法, 如分步结晶法、酶消化法等, 具有很大的局限性, 而且过程繁杂、耗时, 别难于进行微量分离和测定。近年来, 随着各种色谱技术的不断发展与完善, 色谱技术已成为拆分各种手性药物的主要手段, 并在药物分析检验中得以广泛应用。 .一个典型的例子是20世纪50年代末期发生在欧洲的“反应停”事件,孕妇怀孕前三个月服用酞胺哌啶酮(Thalidomide,俗称反应停)可引起胎儿海豹畸形,由反应停致畸的案例全世界达17000例以上,是二十世纪最大的药害事件.1979年德国Born大学研究发现,反应停药物包含的两种不同构型的光学异构体中,只有(R)-异构体起到了镇静的作用,而(S)-异构体则有致畸作用 研究人员进一步研究发现沙利度胺任一异构体在体内都能转变为相应对映体，因此无论是S型还是R型，作为药物都有致畸作用。 从此药审部门对手性药物立体异构体之间不同的药理和毒理作用开始重视。 01严琳 自然界光学活性物质广泛存在于动植物体内。这种生物立体选择和旋光物质的生物合成，是生物系统特有的本能。在药物研究中光学导构体具有不同的生理作用，如抗心率失常药普蔡洛尔(porpanolo), S (一)一导构体药理活性比R(+)一导构体d大100倍。为了提高药物的活性，减少副作用，深人研究药物的作用机理、毒性和代谢，都要求提供准确、快速的分析测定方法和光学纯药物。 98彭清涛 间接法的主要优点为: (1) 可用价格便宜、柱效较高的非手性柱; (2) 反应时可通过选择衍生化剂提高检测灵敏度。其缺点为: (1) 衍生化反应使样品分离时间延长、操作较复杂; (2) 对衍生化剂的纯度、稳定性要求较高; (3) 还要求对映体的衍生化反应须迅速且反应速率一致。 间接方法主要基于外消旋体混合物经柱前衍生化形成一对非对映异构体(Diastereoisomers)。此法又称为非对映体拆分法或柱前手性衍生化法。由于d-型和l-型对映体的物理性质完全相同，只能在手性固定相上才能获得拆分；如果利用对映体分子中的反应基团与某一光学纯试剂反应形成了非对映光学异构体混合物，其物理性质就有较大的差异，因而可在普通固定相（非手性固定相）上实现分离。本法需高光学纯度的手性衍生化试剂(Chiral Derivatization Reagent,CDR)，衍生化反应往往比较繁琐费时；各对映体衍生化反应的速率有时也不相同。由于可采用价格便宜、柱效较高的非手性柱和通过适当的衍生化反应可提高检测的灵敏度，以及衍生化过程中可伴随样品的纯化等优点，柱前手性衍生