体内药物分第六章色谱分析法.ppt

第六章 色谱分析法 药学院药物分析教研室 【大纲要求】 一、概述 二、薄层扫描法 薄层扫描法(Thin layer chromatography scanning method，TLCS) 是指用薄层扫描测定色谱斑点含量的一种方法。 (一)实现操作的规范化和自动化 1．光谱测定 多用于体内药物的定性鉴别。薄层色谱扫描仪在波长200～800nm之间进行斑点的原位扫描，测得该药物的吸收曲线及最大吸收峰位，并与对照品比较从而对检测样品中该成分进一步确证。 2．色谱测定 多用于体内药物的定量测定。被分离的药物斑点在薄层扫描仪上，选择合适的测定参数进行扫描，可得到斑点的面积值，然后与已知量的对照品斑点的面积值进行比较，即可计算出待测样品中被测成分的含量。 (二)薄层色谱溶剂的优化方法 1．窗图法 (Window diagrams) 原理： 2．数值分析法(numerical analysis) (1) 对分法优化粗选溶剂系统 样品的溶解度，选择易溶和微溶的两种溶剂，用定一种溶剂用量，每次只改变一种溶剂体积，依对分法优化基本原理，经实验反复比较，可粗选出分离较好的溶剂体系范围。 (2) 作图预测最佳展开剂系统 计算溶剂系统极性强度近似值εs，以难分离物质对的ΔRf对εs作图，在适当的εs范围内，所有难分离组分都可以得到有效分离。 (3)数值分析法 R=a+bx+cx2 R为难分离物质对的分离度，x为另一种溶剂的体积 3．图示法(graphic presentation) (1)两个最初的混合溶剂中每一个不能含两种以上的溶剂组分。 (2)每对溶质应在最初的一个混合溶剂中获得分离。 (3)不超过三次实验，能选出两种最初展开剂。 (4)图示结果应给出一个能分离出混合物中组分的最佳展开剂。 三、定量分析方法 (一)外标一点法:用一种已知浓度的对照品溶液与样品溶液对比 (二)外标两点法 四、应用示例 (一)薄层色谱扫描法检测血清中对乙酰氨基酚 6．测定结果 第二节 气相色谱法 一、概述 气相色谱法(gas chromatography，GC) 优点： “三高” “一快” “一广” 1.高效能：一般填充柱的理论塔板数可达数千，毛细管柱可达一百多万。 2.高选择性：可以使一些分配系数很接近的以及极为复杂、难以分离的物质，获得满意的分离。 3.高灵敏度：可以检测10?11～10?13g物质，适合于痕量分析 4.分析速度快：通常一个试样的分析可在几分钟到几十分钟内完成。 5.应用广泛：可以分析气体试样，也可分析易挥发或可衍生转化为易挥发的液体和固体。分析的有机物，约占全部有机物(约300万种)的20%。 缺点：要求被测药物及其代谢物必须具有一定的挥发性和热稳定性。 二、仪器简介 (一)载气 (二)进样 1．气体样品 0.1－1ml 2．液体样品 0.1－1μl 3．毛细管色谱的进样 0.01-0.001μl (三)色谱柱 填充柱：4－6 mm，1.5－4 m 毛细管柱:0.1-0.5mm, 数十至数百米，开口毛细管柱和填充毛细管柱 色谱柱组成 (四)检测器 1．氢焰离子化检测器(FID) 氢-空气火焰中能电离的有机药物及其代谢物都可被检出 FID的有效检测浓度在100ng/ml以上，最低检出量可达1ng 2．氮－磷检测器(NPD) 碱焰离子化检测器（AFID）或火焰热离子化检测器（FTD）与FID不同之处是：该检测器火焰处设置有加热的碱金属盐如卤化钠、卤化铷或硅酸铷等晶体，增加了检测器对某种特定元素的灵敏度，如专门对氮、硫、磷等元素敏感。 NPD灵敏度可达10-12g水平。其对含氮或含磷有机药物的灵敏度分别比FID高50倍和500倍。 ECD是一种有选择性的高灵敏度的检测器。它对含有电负性原子或官能团(如卤素、硝基、氰基、巯基、多环芳烃以及金属有机化合物等)的有机或无机化合物特别敏感。 在体内药物分析中常用于测定含有卤素或含有－CONH2、－CN、－ONO、－NO2等吸电子基团的有机药物及其代谢物。 4．质谱检测器 三、定量分析方法 (一)系统适用性试验 1．色谱柱的理论板数(n) 2．分离度 3．重复性 RSD应不大于2.0％ 4．拖尾因子 (二)内标法 1．内标法的基本原理 2．内标物的选择原则 (1)内标物与被测药物只差一个化学元素： 测定血浆中的5-氟尿嘧啶时，选用5-氯尿嘧啶作内标物。 (2)内标物与被测药物为同系物： 测定血中乙醇含量时，常选用丙醇作为内标物。 (3)内标物与被测药物结构相似： 应用最多。 3．内标物的应用 内标物应在样品预处理之前等量加入各管然后在相同条件下进行