体外诊断试剂培训件_图文.ppt

体外诊断产品监管 北京市医疗器械检验所 主要内容 体外诊断产品的种类 体外诊断产品生产的基本原理 生化类产品 免疫类产品 分子类和血液类 溯源性问题 体外诊断作用“医生的眼睛” 预测和诊断功能，如： 血细胞 抗体（肝炎、艾滋、IGE） 基因（唐氏、小儿耳聋、遗传缺陷基因BRCA1）。 疗效和健康监测，如： 代谢物（血糖） 标志物（AFP、PSA、HPV） 蛋白、微量元素（白蛋白、Ca); 体外诊断产品的类别 体外诊断根据风险分3类： III类：致病性病原体抗原、抗体以及核酸、人类基因检测、肿瘤标志物、血型、组织配型、变态反应（过敏原）等； II类：除III、I类，如：蛋白质、糖类、酯类、酶类、维生素、无机离子、激素等； I类：微生物培养基（不用于微生物鉴别和药敏试验）、样本处理用产品，如溶血剂、稀释液、染色液等。 体外诊断产品的类别 体外诊断专业分类:生化、免疫、分子生物学、微生物、体液等,临床使用超过千种。 生化：生物化学反应或免疫反应(生化仪的项目），酶类、糖类、脂类、蛋白、无机元素、肝功能、肾功等指标。 免疫：抗原与抗体相结合的特异性反应，传染性疾病、内分泌、肿瘤、药物检测、血型鉴定等。 分子诊断：分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化，主要用于肝炎、性病、优生优育、遗传病基因、肿瘤等检测。 体外诊断产品的类别 微生物：通过培养鉴别细菌等微生物的方法。 血液学：通过电阻抗、激光和高能电磁波等技术检测血液中血细胞的数量和分类的方法。 生化类产品基本方法 生化分析仪反应的一般称为生化试剂 两点法、终点法、速率法、比浊法 两点法： 测定酶反应开始后某一时间内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量以求取酶反应初速度的方法。 终点法： 通过测定酶反应开始到反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量，以求出酶活力的方法，亦称平衡法。? 速率法： 是指连续测定(每15秒~1分钟监测一次)酶反应过程中某一反应产物或 底物的浓度随时间的变化来求出酶反应的初速度的方法，即连续监测法。 透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目。 生化类产品基本方法 终点法常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）。 两点法：?苦味酸法测定肌酐采用此法 速率法对于酶活性测定，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。（7个酶加葡萄糖、尿素） 免疫比浊法载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗“O”、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。(蛋白） 生化类产品说明书 生化分析仪说明书除法规相关规定外，还至少包括： 适用机型 反应温度（37度） 主波长、次波长 ?孵育时间（终点法或两点法） 延迟时间（连续监测法）、连续监测时间在延迟时间之后即开始，一般为60～120s不少于4个吸光度检测点（3个吸光度变化值）； 加样量 校准液个数（非线性必须两个以上）等。 标准液个数的原因 校准液个数浓度校准曲线线性好并通过坐标零点的，可采用一个校准液；线性好但不通过坐标零点，应使用两个校准液；对于校准曲线呈非线性者，必须使用两个以上校准液。每一个校准液都要有一个合适的浓度。 吸光度 浓度 10 5 6000 3000 8 生化类产品基本原理 氧化反应: 还原反应： 生化类产品质量风险点分析 原材料(辅酶I )（进货检验记录或生产记录中，应包括辅酶空白吸光度的检验记录，且不同的类别符合下述特点） 还原性辅酶I主要用于下降反应，当还原性辅酶I质量出现问题时，试剂的空白吸光度降低，导致试剂测量结果的不确定度变大，测量的灵敏度也随之降低，测量线性范围变小。 氧化性辅酶I主要用于上升反应，当氧化性辅酶I质量出现问题时，试剂的空白吸光度升高，导致试剂测量结果的不确定度变大，测量的灵敏度也随之降低，测量线性范围变小。 生化类产品质量技术风险点分析 生产记录中应包括试剂用水的电导率、PH值及微生物检验记录 生化类产品质量风险点分析 免疫类产品基本原理 Elisa反应的基本原理（酶标仪、发光仪等） 将含有已知抗体的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗涤一次；②加待测抗原，如两者是特异的，则发生结合，然后把多余抗体洗除；③加入与待测抗原呈特异反映的酶联抗体（二抗