UV诱导大肠菌抗鲎素菌株筛选 毕业论文.docx

本 科 毕 业 论 文题目：UV诱导大肠杆菌抗鲎素菌株筛选系别：生物工程系专业：生物技术姓名：学号：092408149指导教师：2012年5月18日目 录摘要iABSTRACTii一文献综述11.1 鲎的分类及地理分布21.2 鲎的形态结构及药用价值21.2.1 外部形态21.2.2 内部构造21.2.3 鲎的药用价值31.3 鲎血淋巴抗菌肽31.3.1 鲎素的抗微生物和抗菌活性41.3.2 抑制肿瘤细胞增殖和诱导癌细胞分化的作用41.3.3 鲎试验法(细菌内毒素检查法)61.3.4 鲎素抗菌肽抗菌机理61.4 物理诱变技术71.4.1 紫外照射71.4.2 电离辐射81.4.3 离子注入91.4.4激光91.4.5 微波101.4.6 空间技术诱变101.5 化学诱变101.5.1烷化剂111.5.2 碱基类似物111.5.3无机化合物111.5.4 其他12二材料与方法132.1材料132.1.1 试验材料132.1.2 主要仪器设备132.1.3 主要试剂142.2 技术路线142.3 实验步骤142.3.1 生长曲线的测定142.3.2 紫外线诱变152.3.3 浓度梯度法筛选抗鲎素菌株152.3.4药敏试验162.3.5 耐药稳定性测定16三结果与分析173.1 大肠杆菌ATCC25922和JM109生长曲线的测定173.2紫外光诱变最佳照射时间的确定183.3 梯度梯度法筛选抗鲎素菌株203.4 药敏试验203.5 耐药稳定性测定20四讨论和结论214.1 讨论214.1.1 大肠杆菌生长曲线的测定方法的探讨214.1.2 紫外线诱导细菌的探讨214.1.3药敏试验的探讨224.2 结论22参考文献24致谢31摘要中国鲎鲎素I(Tachyplesin-I)是从古老的海洋生物中国鲎(Tachypleus tridentatus，Chinese horseshoe crab)血细胞中分离纯化的一种小分子多肽。现已证实中国鲎鲎素具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物活性。本实验以大肠杆菌ATCC25922和JM109为出发菌株，通过紫外线诱变技术对原始菌株进行诱变，并通过鲎素浓度梯度对大肠杆菌进行初筛，采用微量稀释法研究鲎素对初筛的菌株的最小抑菌浓度，以得到抗鲎素的大肠杆菌菌株。实验结果表明：1、通过紫外分光光度计检测波长为600 nm下不同培养时间的菌液的吸光度，，得到大肠杆菌的生长曲线，在培养2～12h时均呈现上升趋势，依次经历迟缓期、对数期、到达稳定期。2.采用紫外线诱变处理的方法，对大肠杆菌ATCC25922和JM109进行处理；大肠杆菌ATCC25922和JM109菌株在照射时间为90s、120s、150s的菌种致死率均90％；在紫外诱变60s时的菌落大小明显变大。3、通过微量稀释法测得鲎素对大肠杆菌ATCC25922和JM109原始菌株的最小抑菌浓度分别为5μg/mL、10μg/mL，最小杀菌浓度分别为20μg/mL、40μg/mL。4、采用紫外诱变和鲎素浓度梯度筛选的的方法，从中筛选得到低抗鲎素的大肠杆菌ATCC25922突变菌株ATCC25922-A1-90、E.coli ATCC25922-A2-90、ATCC25922-A1-60 3株。诱变的大肠杆菌ATCC25922-A1-90和大肠杆菌ATCC25922-A1-90菌株与亲本大肠杆菌ATTCC25922菌株的最小抑菌浓度相比较，其抗药性提高了2倍，大肠杆菌ATCC25922-A1-60其抗药性提高了4倍。对其筛选到的大肠杆菌ATCC25922突变菌株进行连续在多少抗鲎素浓度上进行连续转接12代，其最小抑菌浓度无变化。5、对于大肠杆菌JM109菌株经过紫外线诱变后，一部分发生了负突变，变更为更敏感的菌株和一部分未变化的菌株，未诱导出抗鲎素菌株。关键词： 鲎素 紫外线 最小抑菌浓度 抗药菌株筛选ABSTRACTTachyplesin-I, a cationic peptide consisting of 17 residues,was isolated from acid extracts of horseshoe crab (Tachypleus tridentatus,Chinese horseshoe crab) hemocyte debris. Tachyplesin-I acts as antimicrobial peptide．It has a strong antimicrobial effect on the growth of Gram-negative R-type bacteria and shows antivirus and antitumor activity.To screen the ideal resistant str