抗体工程 - 1PPT.ppt

Fab：抗原结合片断 Fv：可变区片段 ScFv：单链可变区片段 SdAb：单区抗体 二、小分子抗体 小分子抗体 其它生物活性蛋白融合 三、抗体融合蛋白 　 许多抗原抗体反应要求双价的抗原结合位点，使抗原分子上的两个表位交联或使两个抗原分子连接。将识别肿瘤抗原的抗体和识别细胞毒性免疫效应细胞表面分子的抗体连结在一起，可使效应细胞更容易与肿瘤细胞结合识别，取得杀伤肿瘤细胞的作用。 四、双特异性抗体 分别分离纯化两种不同的McAb，使各抗体解离为单价抗体，再使两种不同抗原特异性的单价抗体通过化学试剂交联起来，然后分离出目的组分。此法缺点是容易导致抗体失去活性，产物均一性不佳。 化学交联BsAb 体 工 程 抗体工程 抗体定义 1 多克隆抗体 2 单克隆抗体 3 基因工程抗体 4 抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹 抗体指机体的免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。 抗体结构 抗体的功能 抗体的主要功能是与抗原（包括外来的和自身的）相结合，从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物，抗体（antibody）是一种应答抗原产生的、可与抗原特异性结合的蛋白质。每种抗体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活，也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害，如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生，对人体可造成危害。 抗体攻击病毒 凝集细菌 抗 SARS 的单抗 SARS-CoV 整体水平抗体生成技术 细胞工程抗体生成技术 基因工程抗体生成技术 多克隆抗体（抗血清） 单克隆抗体 嵌合抗体、改形抗体 “小型化抗体”（单链抗体） 组合抗体库技术 噬菌体抗体库技术 抗体真核表达技术 多克隆抗体 多克隆抗体（polyclonal antibody） 指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。 如:免疫血清（含多种特异性抗体）。 实际意义： （1）预防、治疗感染性疾病， 如：破伤风抗毒素血清 ? 抗破伤风， 胎盘球蛋白? 抗病毒感染等 副作用：?超敏反应 （2）临床诊断，如：肥达氏反应 -- 伤寒、副伤寒 缺点：特异性差。 传统抗血清 抗 原 免 疫 所有抗体混合 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 脾 脏 淋巴結 B 細胞 单克隆抗体 单克隆抗体 monoclonal antibody 高度均质性的特异性抗体，由一个识别单一抗原表位的B细胞克隆所分泌。一般来自杂交瘤细胞 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 融合 骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 选择培养基上培养 专一抗体检验阳性 专一抗体检验阳性 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 克隆杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞 单克隆抗体制备过程示意图 多种杂交细胞 基因工程抗体 基因工程抗体制备 基因工程抗体(Genetic engineering antibody) 根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。 将小鼠Ig基因敲除，转染人Ig基因，在小鼠体内产生人Ab，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体 一、人源化抗体 方法： 从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体 特点： 减少了鼠源性抗体的免疫原性 保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力 （一）嵌合抗体 嵌合抗体 定义：指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V）中互补决定簇（CDR）序列改换成鼠源单抗CDR序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。RAb亦叫“重构型抗体”，因其主要涉及CDR的“移植”，又可称为“CDR移植抗体 意义：多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗 （二）改型抗体