显微标本制作技术PPT.ppt

材料破碎 脱水不净 蜡带横纹 刀口钝 切片常见问题 蜡带卷曲 刀口钝 切片太厚 贴片：贴附牢固，在染色时不易脱落；是皱褶的蜡片伸展平整。 （一）用具：载玻片、粘片剂、解剖刀、蒸馏水、展片机及铐片机。 载玻 片 （二）贴片的方法 1.将展片机温度调整到35℃。 2.在载玻片上涂甘油粘片剂。 3.将涂粘片剂的载玻片放在展片机上，滴加蒸馏水数滴，此时若发现水不均匀分散而聚成滴状，即表示玻片不清洁，有残留油脂等物在上面。 4.用解剖刀将蜡带切成小段。 5.将蜡带轻轻移到涂有水的载玻片上，蜡片光面应向下贴在载玻片上，依次排列整齐。留出右端贴标签处。 6.材料展平后，从展片机上取下，稍稍倾斜留出多余的水分，用吸水纸吸干背面及周围多余水分，放于烤片机（35℃）上烤干水分。 九、染料与染色 十封藏 一取材 二固定 三抽气 四冲洗 五脱水 六透明 七浸蜡与包埋 八切片 九染料与染色 九、染料与染色： 染色：是用染料使无色组织切片着色，增加对比度，便于镜下观察。 染色方法很多，但没一种能使细胞全部结构同时着色。 常用酸性染料（伊红、坚固绿、橙黄G），碱性染料（苏木精、亚申蓝、甲苯胺蓝、碱性品红）、硝酸银等进行染色。 最常用: 苏木精（hematoxylin）：细胞核和胞质内的嗜碱性 物质着蓝紫色 。 伊红（eosin）：细胞质基质和间质内的胶原纤 维等着红色。 H.E 1、嗜碱性：细胞和组织的酸性物质（嗜碱性物质）或结构与碱性染料（如苏木精）亲合力强，称嗜碱性。 2、嗜酸性：碱性物质或结构与酸性染料（嗜酸性物质）（如伊红）亲合力强，称嗜酸性。 3、中性：若与两种染料的亲合力均不强的。 4、亲银性：银染法中有些组织结构可直接使硝酸银还 原而显示，称此为亲银性。 5、嗜银性：有些结构无直接还原作用，需加入还原剂 方能显色，称此为嗜银性。 名词： 1.乙醇： （1）按浓度梯度依次进行15%→35%→50%→70%→83% →95%→100%→100%； 15%→35%→50%→70%→83%→95%→100%→100% （2）脱水时的注意事项： ①脱水必须要在有瓶盖内进行，尤其是高浓度乙醇很容易吸收空气中的水份。 ②组织由低浓度向高浓度的乙醇转移时，要用吸水纸吸干余液，以免将水份带入。 ③纯乙醇中如有水，可加无水硫酸铜以吸去水份。 （3）在各级停留的时间： 第一步脱水，须看材料的性质大小而定，体积为2mm3的一般每级为1-4小时； 第二步切片脱水，每级只需3-10min； 在低浓度酒精中，每级停留的时间不易过长，否则易使组织变软，助长材料解体。从95%到100%乙醇后，时间不能太长，否则材料变硬变脆，影响切片。为使乙醇脱水彻底，应更换两次100%乙醇。如需过夜应停留在70%酒精中。 2.丙酮：为很好的脱水剂，可以代替乙醇，其作用和用法和乙醇相似，不过其脱水力和收缩力都比乙醇强。能使蛋白沉淀，组织硬化，不能溶解石蜡，所以仍需经过二甲苯或其他透明剂，然后才能进行浸蜡和包埋。 3.正丁醇：此剂易挥发，可与水和乙醇混合，亦是石蜡溶剂，可不经透明剂直接浸蜡。但一般在应用上还未能完全替代乙醇。多与乙醇按一定比例混合作脱水之用，但最后需经纯正定醇方可浸蜡。很少引起组织块的收缩，变脆。 级别 Ⅰ（ml） Ⅱ（ml） Ⅲ（ml） Ⅳ（ml） Ⅴ（ml） Ⅵ（ml） 蒸馏水 50 30 15 5 0 0 乙醇 40 50 50 40 25 0 正丁醇 10 20 35 55 75 100 4.叔丁醇:可与水，乙醇及二甲苯等剂混合，(可套用上表)也可单独使用，是一种应用很广的脱水剂。此液不会使组织收缩或变硬，不必经过透明，可直接浸蜡。应用此剂可以简化脱水、透明等步骤。因此已逐渐代替乙醇，但价格较贵。 级别 Ⅰ（ml） Ⅱ（ml） Ⅲ（ml） Ⅳ（ml） Ⅴ（ml） Ⅵ（ml） 蒸馏水 40 30 15 0 0 0 乙醇 50 50 50 50 25 0 正丁醇 10 20 35 50 75 100 表1-6各级浓度的叔丁醇： 5.甘油，也是一种良好的脱水剂，尤其对细小柔软的材料更适合。用甘油脱水可以避免原生质收缩，但脱水前必须洗净固定剂，以免影响包埋和染色。利用甘油脱水，可以从50%浓度开始至纯甘油，再换纯乙醇。 6.二氧六环：为无色液体，易挥发燃烧，且有毒，应尽力避免吸入它的蒸气。能与水和乙醇在任何比例下混合，为石蜡溶剂，脱水至纯二氧六环后，即可进行包埋。浓度梯度设计为：30%→50%→70%→90%→100%→100%→100%每级时间为1-6小时。 六、透明 十封藏