枸杞多糖对淋巴细胞功能的影响PPT.ppt

枸杞多糖对淋巴细胞功能的 影响 肿瘤患者在接受放射线和化疗药物治疗时,射线和药物对机体的免疫系统有抑制作用,致使机体的免疫功能进一步下降, 影响了治疗效果, 并可导致一些不良反应。同时研究发现，肿瘤患者免疫功能下降常伴随一些细胞因子水平的变化,如IL-2、IL-12、IFN、TNF等[4]。所以,解决肿瘤患者免疫功能低下问题成为治疗肿瘤非常关键的环节。 最近,国内外学者提出生物反应调节(BRM)的概念,强调在肿瘤放化疗及手术治疗的同时应用 BRM不但能提高患者的免疫功能,还可减轻上述治疗对免疫系统及造血系统的损害,从而提高治疗效果。在我国,中药取自天然,来源广泛,容易获得,不良反应小。为此,本实验试图对枸杞多糖免疫调节作用进行研究,研究其对外周血淋巴细胞增殖及功能的影响。 一.实验原理 枸杞多糖(LBP)是传统中药材枸杞的主要成分之一,由阿拉伯糖、 葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖组成。而实验证明多糖成分(如云菇多糖、灵芝多糖等)可通过激活机体的免疫系统来达到抗肿瘤的目的[1-2],目前对于枸杞多糖抑制肿瘤的免疫调节作用及免疫机制尚不十分清楚。 PHA是T细胞非特异性有丝分裂原,能与T细胞表面CD3/TCR复合体结合,导致包括CD3+、CD4+、CD8+以及LAF-1等细胞表面分子磷酸化,通过激活PKC途径引起细胞活化。 TNF-α能够直接杀死病毒和肿瘤,在CD8+T的成熟阶段发挥着重要的信号作用, TNF-α缺乏时会导致效应性CD8+T细胞产生下降,影响其转化为记忆性T细胞。可见,TNF-α除了对肿瘤细胞具有直接毒性和生长抑制作用外,还可以通过增强CD8+T细胞的细胞毒作用抵抗肿瘤的生长。 本实验主要是以枸杞多糖为材料来研究其对人外周血淋巴细胞免疫调节作用,为进一步开发增强免疫力的抗肿瘤药物提供参考。 二、实验材料与分组 1. 材料 健康人外周血采自 20～30岁健康志愿者。枸杞多糖由本校实验中心从优质枸杞子中分离提取,纯度为99%。RPMI-1640为 Gibco公司产品。植物凝集素（PHA)、MTT试剂均为Sigma公司产品。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、ELISA试剂盒购自晶美生物工程有限公司。淋巴细胞分离液为上海生化试剂二厂产品。胎牛血清(FBS)为杭州四季青公司产品。 2. 分组 据实验孔中加入枸杞多糖质量浓度的不同以及加入或不加PHA将实验分为对照组、PHA组、枸杞多糖组、PHA＋枸杞多糖组。 三 、实验方法 1. 人外周血淋巴细胞的分离和增殖反应 取健康人外周血约5 mL , 肝素抗凝,加入等体积PBS混匀,用淋巴细胞分离液经密度梯度离心法分离外周血单核细胞(PBMC)取白细胞层用PBS洗涤2次,加入含10%FBS的RPMI-1640培养基,置于饱和湿度、37℃、5% CO2培养箱中培养2h。 未贴壁细胞为淋巴细胞,将其重悬于培养液中,2%台盼蓝试验证实细胞存活率95%,调整浓度为2×109L-1。加入96孔板中,每孔100μL,实验孔加入不同质量浓度的枸杞多糖,加入或不加PHA, 枸杞多糖终质量浓度分别为100,80,60,50μg/L,每组均设4个复孔。常规培养72h,各孔加入MTT(5g/L)20 μL,培养过夜,离心弃去培养上清, 每孔加入DMSO 150μL,混匀后以测定波长570nm、参考波长620nm检测各孔吸光度(A)值,并计算增殖指数。增殖指数=实验组A值/对照组A 值×100%。将所测及计算结果记录于表一。 表一 各组外周血淋巴细胞增殖情况比较（x±s,n=4） 组别 浓度/（㎎/L） A值 增值指数 对照组 － PHA组 0.050 枸杞多糖组 50 60 80 100 PHA＋枸杞多糖组 50+0.050 60+0.050 80+0.050 100+0.050 2. TNF-