杭太俊药物分析05--体内药物分析PPT.ppt

药物分析;第五章 体内药物分析;第五章 体内药物分析;第五章 体内药物分析;第五章 体内药物分析;分析对象;第五章 体内药物分析;四、体内药物分析的特点;五、体内药物分析方法;第一节 常用体内样品的制备与贮藏;;采集和制备;2．尿样 目的：药物剂量回收，药物清除，药物代谢和生物利用度 特点：浓度高，易于收集，体内代谢研究，应水解分 离 采集方法：随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿等，定时采集。 贮藏:健康人排出的尿液颜色淡黄至黄褐色,pH在4.8~8.0之间。 3．唾液 唾液中药浓与血浓相关性密切 收集方法 濑口15min钟后采集，离心 收集;;体内样品贮存与处理;1．血样（血浆、血清）及时分离→冷藏， -70℃加入稳定 剂NaF;去活性;第二节、体内样品的前处理;第二节 体内样品分析的前处理;预处理的目的;常用体内样品预处理方法;蛋白质的去除;去除蛋白质方法;去除蛋白质方法;去除蛋白质方法;去除蛋白质方法;（1）优点：①与杂质分离 ②简便 ③浓集④提取率高 （2）提取率：在有机相与水相中的溶解度的比值分配系数，一般少量多次，对生物样品一般一次萃取， 70%重现性;（3）影响提取率的因素 ①pH 碱性药物在碱性pH 酸性 酸性pH ②提取溶剂 相似相溶原理 沸点低，不影响检测,性质稳定，不起化学反应(化学惰性） ③离子强度 加入中性盐 增加离子强度，与水结合强，便于有机溶剂提取 ;对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采用离子对提取 ①原理 ②应用 阴离子：COOH+ SO3H- 反离子 四丁基铵 阳离子：NH2+ 反离子烷基或芳基磺酸盐 提取溶剂用量:一般在试管中进行 有机相与水相比1:1到5:1;分离与浓集;用有机溶剂(甲醇)冲洗——洗净;方法好价格贵;①固相选择 样品1ml 1ml规格固相 1~25ml 3ml规格固相 ②固相处理 反相C18 固定相的6~10倍体积甲醇洗柱，使溶剂化 6~10倍水缓冲服液冲洗达分离状态 ③上样 ④分离 用适当的弱溶剂洗涤 洗去杂质，通N2干燥固相 ⑤洗脱待测物 改变pH或极性 ;（1）流速 流速快，按触不充分，样品流失 回收率低 柱处理 5~10ml·min-1 洗脱 0.2~1ml·min-1（〈300mg?? 2~5ml·min-1（300mg） （2）装样 过载 突破性试验 已知浓度样品液 ① 小体积上柱→洗脱回收百分率 ②加大体积→洗脱回收百分率 ③绘图 当回收率下降时为过载 ;超滤分离法;缀合物的水解;化学衍生法;化学衍生法;化学衍生法;分析方法的建立;分析方法的建立;分析方法的建立;第四节 体内样品分析方法与方法验证;第四节 体内样品分析方法与方法验证;(三)精密度与准确度 (四)定量下限 (五)稳定性 (六)提取回收率 (七)质控样品 (八)质量控制 (九)测定结果;色谱条件优化;相关术语;相关术语;色谱条件优化;色谱条件优化;色谱条件优化;色谱条件优化;色谱条件优化;色谱条件优化;色谱条件优化;色谱条件优化;色谱条件优化;色谱条件优化;液相色谱技术简介;液相色谱技术简介;液相色谱技术简介;液相色谱技术简介;液相色谱技术简介;液相色谱技术简介;液相色谱技术简介;分配系数 可由Langmuir方程得出 Kd---分配系数 q、c---溶质在固相和液相中的浓度 ;保留时间（tR）和保留体积（VR） 反应样品在柱子中的保留或阻滞能力，是色谱过程的基本热力学参数之一。 ;分离度:又称分辨率，用来表示两种洗脱曲线相邻的溶质相互分离的程度。 ;理论板，理论板当量高度（HETP），理论塔板数（N）、 反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系。 理论板：将溶质达到一次分配平衡的色谱柱段。 理论板当量高度：该段色谱柱的高度。;理论板数的计算方法;液相色谱技术简介;种质中心Waters HPLC仪器全图;Waters HPLC仪器分离检测单元图;Agilent HPLC色谱仪器;Waters HPLC仪器内部结构;Waters仪器的分离通道;开尔文探针显微镜描述单个分子里的“电荷分布”图片