检验诊断试剂(免疫)PPT.ppt

酶免疫测定（EIA）;固相酶免疫测定;酶标志物、抗原、抗体、酶免疫复合物;酶标志物——酶标记抗体或抗原 ;酶标记抗体或抗原 ;辣根过氧化物酶HRP上的糖羟基可以被高碘酸钠（NaPIO4）激活生成醛基，这些醛基能通过Schiff碱与蛋白中的氨基偶联，紧接着还原Schiff碱形成稳定的偶联产物。这种HRP偶联标记方法已经被广泛认可，但是也存在一定的缺陷，特别是去除过量高碘酸钠（NaPIO4）的过程较为繁琐。需要注意的是，被高碘酸钠（NaPIO4）激活的HRP很不稳定，其酶活力会在几天内丢失 ;;;评价;;;;;;均相酶免疫测定 homogenous enzyme immunoassay ;均相酶免疫测定 ;;; 利用重组DNA技术制备β-半乳糖苷酶的两个片段：大片段称为酶受体（enzyme acceptor,EA），小片段称为酶供体（enzyme donor,ED），两个片段本身均不具酶活性，但结合在一起就具有酶活性，利用这一特性建立的均相酶免疫测定称为克隆酶供体免疫测定(CEDIA)。 CEDIA的反应模式为竞争法。;一、基本原理：标本中的抗原和ED标记的抗原与特异性抗体竞争结合，形成两种抗原抗体复合物。ED标记的抗原与抗体结合后由于空间位阻，不能再与EA结合。反应平衡后，剩余的ED标记抗原与EA结合，形成具有活性的酶，加入底物测定酶活力，酶活力的大小与标本中抗原含量呈正比。;;;;：健康人O型血或绵羊静脉血，应2w内固化;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;1.概述：以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可滤过性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。 （斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的，应用的结合物是酶标记的，称为斑点酶免疫渗滤试验。90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗滤试验（DIGFA），又名滴金免疫测定法（简称滴金法）。在滴金法中不需酶对底物的反应，更加简便、快速，在临床检验中应用日渐广泛。 ）; ????????????????????????????????????????????? 图19-1 DIGFA渗滤装置及操作示意图 A：操作示意图B:装置分解图;斑点免疫层析试验 ;免疫金银染色