植物细胞的大规模培养PPT.ppt

植物细胞的大规模培养 植物细胞大规模培养方法 悬浮培养 固体化培养 悬浮培养 是一种使组织培养物分离成单细胞接种于液体培养基中，在保持良好的分散状态下培养并不断扩增的方法。 在进行细胞培养时，需要提供容易破裂的愈伤组织进行液体振荡培养，愈伤组织经过悬浮培养可以产生比较纯一的单细胞,而紧密不易碎的愈伤组织就不能达到上述目的。 悬浮培养 悬浮培养优点： 增加培养细胞与培养液的接触面积，改善营养供应 避免细胞代谢产生的有害物质在局部积累而对细胞自身产生毒害 保证氧气的充分供应等。 细胞培养同步化： 1、物理法 1）体积分选 2）冷处理法 2、化学法 1）饥饿法 2）抑制法 影响悬浮细胞生长的因素： 起始愈伤组织的质量 接种细胞密度 培养条件：方式、温度 继代周期 细胞生长情况分析测定方法： 1、细胞计数：单位体积细胞浓度； 2、细胞体积：培养物离心后测定细胞层所占的体积； 3、细胞鲜重或干重：过滤或干燥后称重 4、有丝分裂指数：有丝分裂细胞占总细胞的百分数 细胞活力测定 1、相差显微镜观察法 细胞质环流，正常细胞核 2、FDA（荧光素双乙酸酯）染色法 由于荧光素不能自由的穿越细胞质膜，而能在活细胞中积累，但死细胞、破损细胞不能积累。 3、伊凡蓝染色法 不被染色的为活细胞