毛细管电色谱的方法原理与应用PPT.ppt

加压毛细管电色谱仪的原理及应用 Capillary ElectrochromatographyAdvances and Applications;CEC基本原理;历史回顾和研究现状 ;历史回顾和研究现状 ;历史回顾和研究现状 ;历史回顾和研究现状 ;CEC的优势：;CEC的优势：;CEC的优势：;存在的问题：;目前，pCEC研究的热点： CEC理论的研究； 仪器联用技术的发展； 梯度洗脱技术； 毛细管柱的制备（填充柱或整体柱）； 芯片技术； 应用领域拓展（环境分析，食品分析，生化分析等）； ;历史回顾和研究现状 ;;;;;;;用途: 分析生物活性肽 中草药 多糖等的成分分析. 建立中草药的指纹图谱. 药品的质量监控. 结合高电压系统可提高分析效率.并使图谱更清晰明了.;;图形分析: 黑色代表普通HPLC的血清肽图谱. 粉色代表加-10KV电压后血清肽图谱. 黄色代表加+20KV电压后血清肽图谱. 说明分析: 加负电压后血清肽的出峰时间向后延迟,加正电压后出峰时间向前平移.表明血清肽合流动相后显负电性.样本在淌度和电压共同作用下谱图有变化.可以发现更多成分.同时提高分离效率.因为同一成分在流动相相同的情况下只是淌度不同.现在加了高电压.使以前需很长时间才能出现的峰现在只需很短时间就可出现.;;;TriSepTM-2100加压毛细管电色谱仪操作流程 ;仪器 ;各单元参数设置及操作 ;1．2 输液方式 ;1．2．3 编辑梯度送液程序：在主泵上设置流速FLOW、基本输液比例CONC，编辑时间程序： EDIT 进入编辑状态，输入时间数值，滚动FUNC/BACK 到BCNC输入B相的梯度比例数值，按ENTER确认。常用的参数如BCNC（A、B液比例）、FLOW（流速）、STOP（停止程序）…等。程序编好后，反复按ENTER查看，按DEL清除错误的程序步。按主泵RUN键运行时间程序, 关掉RUN键，泵按梯度初始化条件走。;1．3 系统排气或快速更换溶剂系统  把泵的吸滤头放进已经过滤并除气后的流动相中，加电时出口缓冲瓶中也装满相同的缓冲溶液。将Drain阀向OPEN方向（逆时针）旋转180度，按Purge键，约3分钟后自动停止， 也可自己调整Purge 时间，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。Close Drain阀。把流速调成1ml/min，把四通处连接反压阀的peek螺丝松开，十分钟后再把流速调成0.05ml/min, 把反压阀的peek螺丝拧紧。;2．紫外-可见检测器开启电源后，经过短暂的时间，氘灯点亮，波长显示为254 nm。(不一定是254nm，而是上次关机时使用的波长)，按FUNC/BACK键到改波长处，输入实验需要的波长值， ENTER确认，检测器一般30-60min的预热，然后按ZERO基线调零后，基线稳定后，可以进样。 ;3．高压电源输出电压：0-30kV；电流：0-100μA；最大功率：1W注意：当设置10kV以上电压时，应设置较长升压时间（如10秒），突然升压可导致破坏性后果；当环境潮湿时，不要设置超过10kV的电压。3．1 开机后，按MENU ，以上下箭头选择分析模式：电色谱 CEC 或电泳CE，ENTER确认;3．2 以上下左右箭头输入电压（最小单位100V）、升压时间和电场方向+/-，ENTER确认。确认检测器和微流控制单元仓门关闭、背板电缆连接正确，按RUN 执行注意，改变电压输出极性时，还要改变后面板高压线的插孔位置，设置输出为正电压时，后面板高压线插在“HV+”孔，设置输出为负电压时，后面板高压线插在“HV-”孔，地线始终接在“HV0”孔不变；设置好输出电压极性，按ENTER键 确定;3．3 CE 模式下，还需输入电动进样的电压和时间。把进样条件和运行电泳的条件设好后，首先运行一下RUN ，按RESET键断电后按INJECT ，系统执行进样设置，完成后电压降至0。（每次改条件后都要先运行一下RUN后才能进样）3．4 RESET键：进样、升压时按下，电压降至0；分析完成，按此键退至上级菜单。;装柱： ;分析样品;4．分析结束，存储色谱数据，RESET停止高压。 5．清洗色谱柱、仪器管路、进样针，进样口；关闭各部分电源；填写使用记录。 ;