2015年度微生物检验技术培训.pptVIP

三、微生物限度检查（微生物计数法） 5结果判断 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真菌菌落数）； 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。 使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。若采用MPN 法，测定结果为需氧菌总数。 * 三、微生物限度检查（微生物计数法） 5结果判断 各品种项下规定的微生物限度标准解释如下： 101cfu： 可接受的最大菌数为20； 102cfu： 可接受的最大菌数为200； 103cfu： 可接受的最大菌数为2000：依此类推。 若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。 * 三、微生物限度检查（控制菌检查法） 2.非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 2.1 总则：环境、要求 2.2 培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性检查、控制菌检查方法适用性试验、 2.3 供试品检查：阴性对照试验、阳性对照试验、耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌 * 三、微生物限度检查（控制菌检查法） 2.1总则 控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。 供试液制备及实验环境要求同“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（通则1105）。 如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。 * 三、微生物限度检查（控制菌检查法） 2.2 培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验 2.2.1菌液制备 2.2.2培养基的适用性检查 2.2.2?控制菌检查用培养基的适用性检查 2.2.3控制菌检查方法适用性试验 * 三、微生物限度检查（控制菌检查法） 2.2.1菌液制备 试验菌株 试验菌液的制备 金黄色葡萄球菌〔CMCC(B) 26003)〕 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基 30～35℃，18～24小时 铜绿假单胞菌〔CMCC（B)10 104〕 大肠埃希菌〔CMCC（B）44 102〕 乙型副伤寒沙门菌〔CMCC（B）50 094〕 白色念珠菌〔CMCC(F) 98 001〕 沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，20～25℃，2～3?天 生孢梭菌〔CMCC（B）64 941〕 梭菌增菌培养基，厌氧条件下30～35℃，24～48 小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃，18～24 小时 * 三、微生物限度检查（控制菌检查法） 菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液，稳定的孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 * 二、无菌检查 3.方法适用性试验（方法验证试验） 当进行产品无菌检查法时，应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。 方法适用性试验也可与供试品的无菌检查同时进行 。 * 二、无菌检查 4.供试品的无菌检查 无菌检查法包括 薄膜过滤法 直接接种法 只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 供试品无菌检查所采用的检查方法和检验条件应与方法适用性试验确认的方法相同。 无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。 * 二、无菌检查 4.供试品的无菌检查 ?阳性对照? 应根据供试品特性选择阳性对照菌： 无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌； 抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌； 抗厌氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌； 抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。 阳性对照试验的菌液制备同方法适用性试验，加菌量小于100CFU，供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的