人参皂苷提取物对酒精性肝损伤的保护性探究.docVIP

人参皂苷提取物对酒精性肝损伤的保护性探究 　　人参是多年生草本植物，生长于北纬33度—48度之间的海拔，数百米的以红松为主的针阔混交林或落叶阔叶林下，产于中国东北、朝鲜、韩国、日本、俄罗斯东部。人参的别称是黄参、地精、神草、百草之王，是闻名遐迩的“东北三宝”之一，与琼珍灵芝，东阿阿胶被称为中药国宝。 　　人参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根，红参是人参经过高温炮制后得到的加工品。人参具有抗氧化、抗衰老、提高机体免疫力及护心保肝等药理作用。乙醇在体内主要经肝脏代谢，其代谢物乙醛及代谢过程中产生的活性氧会对肝脏造成损害，长期饮酒和过量饮酒，会造成乙醇在体内堆积，对肝脏造成不同程度的损伤，损伤程度从轻到重表现为脂肪肝、肝纤维、肝硬化[1],引起机体内天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、三酰甘油(TG)、丙二醛(MDA)等生化指标水平增高。人参皂苷是红参的主要活性成分，《中国药典》和国家标准均以人参皂苷为红参的考核指标。近年来，有研究发现红参具有保肝功能[2-3],本文旨在研究人参皂苷提取物对小鼠酒精性肝损伤的防治作用，揭示作用机制，为红参的临床应用提供依据。 　　1材料与与仪器 　　1.1仪器 　　InfiniteM200pro酶标仪(瑞士帝肯);Lecia-DM2500微生物显微镜，德国Lecia公司。 　　1.2药物与试剂 　　鲜人参，为5年生，产自吉林省抚松县，由长春中医药大学王淑敏教授鉴定为五加科人参属人参PanaxginsengC.A.Meyer干燥根;联苯双酯滴丸(浙江万邦药业有限公司，批号;56°北京红星二锅头酒(北京红星二锅头酒厂，批;ALT试剂盒、AST试剂盒、MDA试剂盒、GSH试剂盒(南京建成生物工程研究所，批;TG试剂盒(浙江东瓯生物工程有限公司，批号2015040104)。 　　1.3实验动物 　　清洁级ICR雄性小鼠，体质量20~22g,由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK-(吉)2014-005. 　　2实验方法 　　2.1红参炮制 　　称取鲜人参约300g,用纱布包好，放入蒸参箱，在60min升温到100℃后蒸制6h,蒸制完毕后置于50℃烘干箱内烘干。将烘干后的红参研碎成粉，过80目筛。 　　2.2人参皂苷提取物(Ginsengsaponinextracts,GE)制备 　　称取红参粉末，加入8倍量80%乙醇，超声提取(500W,100Hz)30min,抽滤，滤渣加入6倍量乙醇超声30min,滤过，合并滤液，40℃水浴蒸干，加入适量水溶解，即得人参皂苷提取物(人参总皂苷含量为3.84%)，4℃下保存待用。 　　2.3动物分组 　　取清洁级ICR雄性小鼠72只，正常喂养5d后，将其按体重平均分为6组，分别为对照组、阳性组(联苯双酯)、模型组及GE高、中、低剂量组，每组12只。 　　2.4动物造模及给药 　　给药剂量按照成人日均用药量与小鼠给药量进行剂量换算，除对照组每天ig等体积的蒸馏水外，其余各组ig给予56°白酒，给药剂量为0.2mL/20g,1次/d,造模5d.给药组给予GE,低、中、高剂量组每日分别给予0.38、0.75、1.13g/kg生药材浓度的GE,阳性对照组给予联苯双酯0.90mg/kg,给药后1h给予56°白酒，1次/d,连续30d.小鼠给药期间每周进行称质量并记录，并观察小鼠的毛色、饮食、行为及死亡情况。 　　2.5样本采集 　　处理前禁食12h,给药及白酒1h后，小鼠摘眼球取血，常温静置后待其凝固，3000r/min离心15min,取血清，?80℃保存待测。采血后，迅速剖取肝脏，用冷生理盐水洗净，滤纸吸湿后，称取肝脏湿重，计算肝脏系数(肝脏系数=肝质量/体质量)。取肝右叶做HE染色，肝左叶制备10%肝匀浆，匀浆制备方法：用冷生理盐水冲洗肝脏至无血色，称质量，加入9倍量冷生理盐水机械匀浆，将匀浆液2500r/min离心20min,4℃，取上清。 　　2.6生化指标检测 　　每组取同等样本量的小鼠血清及肝匀浆，严格按照试剂盒操作方法进行小鼠血清ALT、AST、TG、肝匀浆MDA、GSH含量测定。 　　2.7肝组织病理学检查 　　取小鼠肝脏右叶置于10%中性福尔马林中进行固定，经一定梯度浓度的乙醇脱水、石蜡包埋、切片进行HE染色，用显微镜观察肝组织病理变化。 　　2.8数据处理 　　应用SPSS19.0统计软件进行统计分析，采用单因素方差分析，组间比较采用最小显着差数法(LSD)，数据均以x±s表示。 　　3结果 　　3.1小鼠状况观察 　　试验期间，GE中剂量组及阳性组死亡小鼠4只，其余各组死亡小鼠2只。对照组小鼠精神状态正常，毛色正常，