液相连电化学检器常见问题解答.docVIP

HPLC中电化学检测器使用时的常见问题解答 一,如果基线噪音大或发生漂移(不稳)该怎样处理. 　　基线噪音大或飘移一般与高背景本底电流有关,而使背景电流变大的因素很多.下面例举一些有可能 　　引发HPLC-ECD系统背景电流变大的因素.而除了大的背景电流外 还有别的因素可引起噪音.千万记住, 　　下面例举的因素仅是一部分可能的因素,而且电化学电池本身不会产生特别的背景电流.背景电流是因分析条件,系统性能,已使用电化学电池的时间长短和处理电化学电池方法的不同而产生. 　　引发高本底电流的一般因素: 　　水!HPLC-ECD系统中使用的水非常关键,要求每厘米的阻抗必须大于或等于 18 兆欧姆.因而建议 　　水要进一步的纯化,通过一种被称作洗水的过程.(参考ESA的技术说明Water Polishing文件目录号:70-1668) 　　制备样品或制作流动相时使用了不纯(或被污染)的化学药品.样品本身也许就是污染源.氧化铝或在萃取时带入的杂质有可能会进入HPLC系统,从而污染色谱柱和电极. 　　流动相中的电化学活性试剂(如:EDTA,TEA).EDTA 是流动相中经常使用的一种试剂,用于螯合氧 　　化的金属离子,可降低本底电流.在电势大于400毫伏时,这种化合物(EDTA)具有很高的电化学活性. 　　如果工作电势大于400毫伏,流动相中就不能再使用EDTA而应改用柠檬酸盐来代替.TEA(三乙醇胺)是用来改善色谱峰的峰形.这种添加剂会含有电化学活性的杂质,在高电势时这种杂质会发生特别的氧化反应. 　　因此要用最小量的TEA,典型的用量小于100 L/L或者对HPLC的色谱柱没有活性的用量. 　　系统中的不锈钢管可能被腐蚀.进入系统的污染物或腐蚀处的脏物可能引起电化学电池受污染(淤塞)或本底电流变大.建议用不锈钢管的用户需定期钝化系统管路或者换用PEEK管.PEEK管可直接从ESA购买. 　　如果脉冲阻尼器破裂,会有污染物进入系统,导致增大背景电流或压力升高. 　　其它引起噪音或漂移的来源: 　　泵头里有溶解于流动相中气体.泵压的波动通常与此有关.要确保流动相被很好的脱气.把泵停下来,等压力下降后,然后把泵清洗(purge)30秒.流动相在进入系统使用前要脱气 (详情见下面的第6点) 　　电化学电池中有溶解在流动相中的气体.要确保流动相被充分脱气. 　　带清洗头的电化学电池(如:5014B和 5041型电化学电池)在使用前可能没有被很好的清洗. 　　安培法电化学电极(如:5040和5041型电化学电池)有可能在目标电极处有小的泄漏.这主要是由安装垫圈和电极失误造成的.要牢记电极不能装的太紧,同时要确保在装配前所有部件必须完全是干燥的. 　　二,怎样清洗电化学电极 　　参见技术说明Prolonging Cell Performance( 文件目录号:70-5017). 它包含文字指导和技术 　　说明以保障电化学电极在最好的状态下工作. 　　三,关闭系统时应注意什么 　　关闭电化学电极的电势. 用适当的洗液清洗整个系统(看下面的注意).在电化学电极关闭和泵中的液体停止流动时,并非系统中的所有设备都必须得断电.如果系统需长期存放建议断掉所有设备的电源. 　　注意:对于HPLC-ECD系统,设备的断电程序因其需停机时间长短不一而不同. 下面是不同情况下合理的断电程序 　　四,停机一晚上 　　非梯度系统--如果每天都在用此系统,应让ECD系统一直开着.在此情况下,关掉电化学电极并让流动相以 0.1mL/min 的低流速循环(看下面的第4点). 　　梯度系统--对于梯度系统你不能再循环.而应使A和B各以50%的量组成流动相并使其总流速为0.025mL/min运行系统, 流动相排到废液中. 　　五,长期停机 　　彻底冲洗系统以洗掉盐类物质.建议使用的冲洗剂应与实验时用的流动相一致,只是不再含有缓冲剂或盐类添加剂(如有机溶液和水).注意!如果水或低浓度的有机溶液留在HPLC系统中时间很长有可能发生霉变并导致别的一些问题.对于硅填料的反向柱,水可能导致在线柱停留20到30分钟不能被使用.在冲洗完盐后,建议用柱子的生产厂家推荐的保存液再冲洗柱子,然后取出柱子并盖好盖子以防柱子变干. 　　如果存放时间超过几个月,系统也应封存好. 　　注意:大部分EC应用的缓冲液盐浓度在50-100mM.如果没有流动,便有盐在 HPLC系统中沉淀. 　　此沉淀能引起高的背压和鬼峰及其它问题. 另外,没有有机溶液(如:甲醇)的水性溶液易长菌.为防止长菌,ESA推荐使用有杀菌作用的试剂如MB(产品号:70-1025). 　　六, 为什么要用孔径为0.22 m的尼龙过滤器过滤流动相和样品 　 使用孔径为0.22 m的过滤器有两个主要原因. 　　第一个原因是要滤去流动相中微粒以减少柱