北航课件-第十章发光光谱.ppt

（三）磷光分析仪器 与荧光分析仪器相似，主要差异如下： 1. 试样室 试样需在液氮温度（77K，-196℃）下测定低温磷光（将液池放在盛放液氮的杜瓦瓶内） 2. 磷光镜 有些物质既可产生荧光，又能产生磷光。用机械切光装置——磷光镜区别荧光和磷光。利用荧光寿命短，磷光寿命长消除荧光干扰。 六、 荧光、磷光分析及应用 （一）定量分析方法 定量分析依据 If = KC Ip = KC 1. 标准曲线法——最常用的定量分析方法 将已知量的标准物质与试样在相同条件下处理，配制一系列标准液，测定它们的相对发光强度。 以相对荧光强度为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标 浓度 C1 C2 C3 C4 C5 Cx 荧光强度 If1 If2 If3 If4 If5 Ifx If Cx C 2. 荧光猝灭法 把荧光猝灭用在定量分析上，具有较高的灵敏度和选择性 若荧光物质 M 与猝灭剂 Q 生成不发荧光的基态配合物MQ M + Q = MQ（非荧光物质） 经推导得出： 猝灭剂加入前 的荧光强度 猝灭剂加入后试 液的荧光强度 常数 猝灭剂浓度 I前/I后与C（Q）有线性关系，可求猝灭剂含量 与标准曲线法相似，对一定浓度的荧光体系，分别加入一系列不同量的猝灭剂 Q ，配成一个荧光物质—猝灭剂体系，然后在相同条件下测定它们的荧光强度，得一曲线 取相同荧光物质 CM CM CM CM … CM 加不同量Q CQ0 CQ1 CQ2 CQ3 … CQx (CQ0=0) 测 If I前 I后1 I后2 I后3 … I后 x 计算 I前/I后 I前/I后1 I前/I后2 I前/I后3 … I前/I后x I前/I后x CQx CQ I前/I后 3. 比较法——比较简单 如果试样数量不多，可用比较法进行测量 配一标准溶液浓度为Cs， Cs与未知液浓度Cx相近，并在相同条件下测定它们的荧光强度 未知液 If x = KCx 标准液 If s = KCs 比较 4. 多组分混合物的荧光分析 (1) 如果两组分的荧光峰相互不干扰,可直接测定 可分别在各自的?荧波长处测定,求出它们的含量 (2) 如果两组分的荧光峰相互干扰,但激发光谱有显著区别,在某一激发光下一个组分产生荧光峰,另一组分不产生荧光; 可选用不同的激发光进行测定 Al3+—8-羟基喹啉配合物的氯仿溶液 ? ex =365nm ? em=520nm Ga3+—8-羟基喹啉配合物的氯仿溶液 ? ex =436nm ? em=520nm 365nm激发光， Al3+的配合物产生荧光，而Ga3+配合物不产生荧光，无荧光峰； 436nm激发光， Ga3+ 的配合物产生荧光，而Al3+配合物不产生荧光，无荧光峰 在365nm条件下激发，520nm处测Al3+—8-羟基喹啉配合物，在436nm条件下激发，520nm处测Ga3+—8-羟基喹啉配合物 例： (3) 如果两组分的荧光光谱和激发光谱相互干扰 利用荧光强度的加和性（F=F1+F2+F3+…），在适宜的荧光波长处测定，用联立方程来求解 例：硫胺荧 CT ? ex =385nm ? em=435nm 吡啶硫胺荧CP ? ex =410nm ? em=480nm 相互干扰荧 光光谱重叠 在385或410nm下激发，在435和480nm下分别测荧光强度 在385或410nm下激发，在435和480nm下分别测荧光强度 If 435/385=26339?104CT+210 ?104CP If 480/385=9685?104CT+1022 ?104CP If 480/410=2816?104CT+1709 ?104CP If 435/410=6419?104CT+252 ?104CP 硫胺素浓度 吡啶硫胺素浓度 If =KC——K: 纯物质在选定波长下测If,求K 385nm激发 或410 nm激发 联立解方程即可求出CT，CP （二）荧光分析法的应用 荧光