实用组织化学技术-常规病理组织学与组织化学.ppt

切片操作： ⑴．将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块切面暴露出来、修平，固定在切片机标本台上并拧紧螺旋。 ⑵．切片刀固定于刀台上，拧紧固定刀的螺丝，同时调整刀与蜡块的切片距离，使刀与蜡块贴紧后再固定刀台螺丝，刀的角度为25度角。 ⑶．调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为 6-7微米） ⑷．修材。右手握旋转轮摇把，按顺时针方向均匀地摇动直到组织块切面完整为止。如果以上各部操作正常，此时能切出一条完整的连续的蜡带，用毛笔轻轻将蜡带顺刀口挑下，放在托盘内待用。 3、水浴锅展片、捞片 通电后将平皿内水温升至45℃左右，将已切好的薄片切割数片轻漂水中展平，不平时可用小弯镊子轻轻展平，然后用涂有蛋白甘油等粘附剂的载片在水中选择完整的切片以一定角度进行捞片。 注意事项： 1．切片刀要锋利，否则切片有切痕或组织破碎，甚至切不下来。 2．展切片时水温要适当，水温低展不平切片，影响效果，有皱折；水温过高切片入水后蜡片及组织熔化。 八、染色 染色前准备工作 染色用的工具： 12个染色缸或者盛各种不同浓度的酒精染色筐广口瓶，染色缸及脱蜡、透明用的各二个二甲苯缸，盖片，带磨口盖的树胶瓶一个，镊子等。 染色需要的试剂及染色液的配制： ①盐酸—酒精：主要是染色分色时用。一般采用0. 5—1％的浓度，即在100ml的70％—80％酒精中加人0.5或者1ml的浓盐酸。 ② 苏木素（Hematoxylin） 苏木素为细胞核的染料，不经氧化的苏木素是不具有染色能力的。苏木素的配方很多，一般组织化学染色所配制的苏木素有二类：一类是自然氧化的苏木素，另一类是加入氧化剂加速氧化的苏木素。 ③伊红（曙红， Eosin） 是细胞质最常用的染料之一。外观是红色粉末。分两种，一种是酒溶性伊红，另一种为水溶性伊红。使用前要看说明以免配错。 一般组织病理学切片染色，染细胞核用苏木素，染细胞质用伊红，故称之为HE染色（苏木素-伊红染色法）。 染色方法及步骤（以HE染色为例） 1．脱蜡，将干燥的切片入二甲苯I 10-20分钟，然后移入二甲苯Ⅱ 10-20分钟。 2．脱苯：用无水乙醇I 脱苯2-5分钟，再经无水乙醇II 2-5分钟。 3．水化：再经95％→90％→80％→70％酒精各1分钟，入蒸馏水浸洗数分钟，每步操作要轻。 4．染细胞核，将切片移入苏木素染液中染10-20分钟。 5．水洗（水洗一下，将浮在表面的染液去掉）。 6．l％盐酸酒精分化，时间几秒钟，肉眼观察切片组织材料呈粉红色即可。 7．兰化：水道流水洗（半小时-24小时），切片从粉红色转变为鲜艳的兰色，这过程也称为兰化的过程。必要时放入氨水的低碱液中浸几分钟。 8．染细胞质：用0.5％或者l％伊红水溶液进行染色，1-5分钟。 9．切片脱水：是由低浓度酒精到高浓度酒精。 将切片入70％→80％→90％→95％酒精，时间几秒钟，时间长了，伊红易脱色，注意伊红与苏木素的对比染色的色调适合。 10．彻底脱水，100％酒精I 5—10分钟，再入100％II酒精 5—10分钟。 11. 透明：入二甲苯I 2—5分钟，再入二甲苯II 2—5分钟。 实用组织化学技术 中国医科大学法医学院 张国华 细胞化学和组织化学 cytochemistry and histochemistry 是以细胞学、组织学为基础，运用物理的和化学的技术方法显示细胞组织结构中各种化学成分，并对这些化学物质进行定性、定位、定量（半定量），从而分析研究生物在生理或病理状态下细胞组织的代谢、机能及形态变化规律。 其在医学研究中具有广泛的应用价值。 细胞和组织化学方法其原理是运用已知的化学反应过程使细胞组织内的各种化学物质在原位形成可见的最终有色产物。 光学显微镜观察－显微镜细胞组织化学 电子显微镜观察－电镜细胞化学 免疫技术方法 －免疫组织化学 免疫电镜细胞化学 用细胞和组织化学方法显示细胞组织结构中各种酶的定性、定位、定量－酶组织化学 酶组织化学－宏观酶组织化学 光镜酶组织化学 电镜酶组织化学 细胞和组织化学方法研究的范围 1. 组织细胞中的无机物质：主要包括钾、钙、锌、铜、汞等金属；氯化物、磷酸盐等盐类；以及各种无机放射性物质等。 2. 组织细胞中的有机物质：主要包括中性脂肪、磷脂类、胆固醇、中性和酸性粘多糖类、糖原、粘液蛋白、淀粉、类淀粉物质、黑色素、脂褐素、胆色素、氨基酸、肽、蛋白质、DNA、RNA、各种维生素等。 3. 组织细胞中各种酶类：如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶等--蛋白