实验五果蝇唾腺染色体标本的制作与观察.pptVIP

实验五 果蝇唾腺染色体标本的制作和观察 一、实验目的 学习剖离果蝇幼虫唾腺和压制唾腺染色体标本的方法；观察唾腺细胞的巨染色体。 二、实验材料 果蝇三龄幼虫 三、实验原理 果蝇唾腺染色体是一种典型的多线染色体。它是果蝇唾腺细胞核内有丝分裂所致，即核内染色体中的染色线连续复制而染色体并不分裂，结果使每条染色体中的染色线多达500～1000条，其长度和体积分别比其它细胞的染色体长100～200倍、大1000～2000倍，因此也称巨型染色体。由于每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一，因而出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。不同染色体的横纹数量、形状和排列顺序是恒定的。利用这些特征不仅可以鉴定不同的染色体，还可以结合遗传实验结果进行基因定位。此外，由于其体细胞同源染色体的配对，故易于进行染色体的缺失、重复、倒位和易位的细胞学观察和研究。 四、实验用具药品 1．仪器用具：显微镜、双目解剖镜、培养瓶、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、酒精灯、火柴等。 2．药品试剂：无水酒精、冰醋酸、1%醋酸洋红、改良品红、生理盐水（0.7%NaCl）、1N盐酸、蒸馏水。 3．培养基：玉米琼脂培养基。 五、实验步骤 幼虫培养： 置于16—18℃下饲养，当幼虫爬上瓶壁准备化蛹前，即为三龄幼虫，此时虫体肥大，便于解剖，是制备唾腺染色体的最理想时期。 2.腺体剖取 3.解离 把载玻片上的幼虫其它部分除去，用吸水纸小心吸去生理盐水（注意吸水纸应离唾腺远些，以免吸附唾腺），加1滴1N HCl，浸2—3分钟，使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体散开。 4.染色 用吸水纸吸去盐酸，加1滴蒸馏水轻轻冲洗后吸干，加2滴醋酸洋红或改良品红染液，染色5—20分钟（此过程应保持腺体一直处于染液的浸泡中）。 5.压片 换上新鲜染液或45%醋酸，盖上盖玻片压片，然后用吸水纸包被玻片，吸干多余染色液，并用手指轻压盖玻片，再用铅笔的橡皮头或解剖针柄垂直轻敲，或进一步用拇指在盖玻片上适当用力压片 6.观察 将制片置低倍镜下找到分散好的标本，移至视野中心，然后转到高倍镜下观察。对染色体分散、个体性清楚的片子，应仔细观察染色体的横纹数量、形状和排列顺序，以便对照模式照片辨认出不同的染色体臂。 六、作业及思考题 1.绘制你在显微镜下所看到的果蝇唾腺巨染色体图，标明实际标本在观察中所能分辨的典型部位。 2.每人制1张染色体分散、横纹清晰的临时片。 3.什么是染色中心（chromocenter）? 4.根据你所学的知识，联会（synapsis）应出现在什么类型的细胞中？ 5.利用巨大染色体可以进行哪些遗传学研究？ * *