检验技术化学发光与荧光免疫技术及仪器.ppt

3．微粒子化学发光免疫分析 (microparticle chemiluminescence immunoassay，MLIA) 以顺磁性微粒作为载体包被抗体，利用磁性微粒能被磁场吸引，在磁力的作用下发生力学移动的特性，迅速捕捉到被测抗原。 加入碱性磷酸酶标记的第二抗体，形成磁性微粒包被抗体-抗原-酶标记抗体复合物 经洗涤去掉未结合的抗体后，加入ALP的发光底物AMPDD，AMPDD被复合物上ALP催化发光,发射光所释放的光子能量被光量子阅读系统记录，通过计算机处理系统将光能量强度在标准曲线上转换为待测抗原的浓度。 原理: AMPDD一侧的芳香基团上的磷酸酯被水解，失去一个磷酸基而生成一个中等稳定的中间体AMPPD(半衰期2～30min)，此中间体通过内部电子转移而裂解为一分子的金刚烷酮和一分子激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子，当回到基态时发出波长为470 nm的光) 常用标记物: A L P 反应特点: ①可采用竞争法和夹心法,多采用双抗体夹心法 ②采用磁性微粒作为固相载体，以碱性磷酸酶作为标记物，固相载体的应用扩大了测定的范围,检测水平可茯Pg·mL-1，重复性好。 五、相关仪器介绍 ADVIA CENTAUR全自动免疫分析仪 (一)ADVIA CENTAUR检测原理 利用化学发光和磁性微粒子分离技术相结合的测定方法，用高敏感性的吖啶酯作为化学发光标记物，以极细的磁性颗粒(PMP)作为固相载体，提供最大的包被面积 。 1．液相　吖啶酯(AE)。 2．固相 氧化铁(Fe2O3)。 包被面积大,减少了扩散时间,增加了捕获效率 (二)ADVIA CENTAUR的反应类型 1．双抗体夹心法 2．竞争法 包括AE标记抗原法和AE标记抗体法。 * * * * 第十一章 化学发光和荧光免疫技术及仪器 第一节 化学发光免疫分析技术 第二节　电化学发光免疫分析 第三节　时间分辨荧光免疫分析法 第四节　荧光偏振免疫分析法 第五节　化学发光免疫分析的临床应用 内容概述: 教学目标和要求 掌握化学发光免疫分析技术的基本原理、反应的底物和标记方法以及反应类型。 熟悉电化学发光免疫分析的基本原理和标记物，时间分辨荧光免疫分析法的基本原理及其标记物和螯合物。 了解荧光偏振免疫分析法的基本原理和技术特点，化学发光免疫分析的临床应用 第一节 化学发光免疫分析技术 基本原理 反应的底物 标记方法 反应类型 相关仪器 一、基本原理 化学发光，是指伴随化学反应过程所产生的发光的发射现象。某些物质在进行化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应物分子形成电子激发态，当电子从激发态返回到稳定的基态时，多余的能量就以光子的形式发射出来。这一现象称为化学发光。 A + B C* + D, C* C + h? (一)产生化学发光反应的条件和过程 化学发光与荧光的区别: 化学能 光能 化学发光反应的条件 : 反应必须提供足够的激发能焓变(△H)介于170～300 kj·mol-1 之间，才能在可见光范围观察到化学发光现象 吸收了化学能后处于激发态的分子或原子，必须以光子形式将能量释放出来，或者将能量转移到另一种物质的分子上并使该分子激发，当被激发的分子回到基态时，也以光子的形式释放能量 (二)化学发光效率 化学发光反应的发光效率(φCl)又称为化学发光总能量的产生率 φCl取决于生成激发态产物分子的化学激发效率 (φCE) 和激发态产物分子的发射效率(φEM)。 一般化学发光反应，φCl值约为10-6 (三)强度与反应物质浓度之间的关系 反应物的浓度 反应速度 化学发光反应所发出的光的强度 (四)化学发光的反应类型 直接化学发光 间接化学发光 1．直接化学发光 化学反应释放的化学能激发的是反应产物分子 A + B C* + D, C* C + h? 2．间接化学发光(敏化的化学发光 ) 在化学反应中，激发能传递到另一个未参加化学反应的分子上，使该分子达到电子激发态，再由激发态分子返回到基态时发光；或反应首先生成一种高能量的中间体，此中间体再将能量转移给另一个未参加化学反应的分子，使该分子达到电子激发态，再由激发态分子跃迁回到基态时发光的过程。 A + B C* + D , C* + F F* + E, F* F + h? 二、反应的底物(发光剂或发光底物) 在化学发光反应中，