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常用的电泳液
常用的配制:一、DNA电泳
1. Tris-乙酸(TAE:Tris/Acetate/EDTA)
浓贮存液/L(50×):2mol/L Tris-碱,1 mol/L 乙酸,50 mmol/L EDTA
方法: 242.2 g Tris,用300mL水加热搅拌溶解后,加57mL冰乙酸,加入100mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0),用冰乙酸调pH值至8.0,定容为1L。2. Tris-硼酸(TBE:Tris/Borate/EDTA)
浓贮存液/L (5×) : 90mmol/L Tris-碱,890mmol/L 硼酸盐,20mmol/L EDTA(pH8.0)
方法:54g Tris碱、27.5硼酸、20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0),水定容至1L。
使用液:(0.5×):0.045mol/L Tris-磷酸,0.001mol/L EDTA
注:进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的是1×TBE,琼脂糖凝胶电泳使×TBE,这是因为聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小,需加强离子强度,提供稍高一些的电流。
3. Tris-磷酸(TPE)
浓贮存液/L(10×):0.9mol/L Tris-磷酸、0.02mol/L EDTA
方法:108g Tris碱、15.5ml 85%磷酸(1.679g/ml)、40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0), 水定容至1L。
使用液(1×):0.09mol/L Tris-磷酸、0.002mol/L EDTA Tris-甘氨酸Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。浓贮存液/L(×):mmol/L Tris 、1.25mol/L EDTA、0.5%SDS
方法:15.1g Tris碱9.4甘氨酸(电泳级)(pH8.3)50ml 10%SDS(电泳级)(1×)25mmol/L Tris 、250mmol/L EDTA、0.1%SDS
5.TBS 电泳缓冲液:100ml TBE,0.5ml的10% SDS。
.6×上样液:0.25%溴酚蓝(BPB),40%蔗糖,10mmol/L EDTA(pH8.0)。即2.5ml 1%溴酚蓝,2.5ml 1%二甲苯青FF,4g蔗糖,补足水到10ml,4℃保存。
二、RNA电泳
1.RNA标准相对分子质量如28S和18SrRNA以及9S兔β-球蛋白mRNA,其RNA大小为6333、2366和710个核苷酸。
2.DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水:
0.1% DEPC,水,即加1ml DEPC(diethlpyrocarbonate)于1L水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺其反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
3.5×FGRB(formaldehyde gel-running buffer):
100mmol/L 3-(N-吗啉代)-丙磺酸(MOPS,pH7.0),40mmol/L醋酸钠,5mmol/L EDTA(pH8.0)。即准确称取20.93g MOPS用DEPC处理水溶解,再加入13.3ml的3 mol/L NaAc(pH7.0),10ml的0.5 mol/L EDTA(pH8.0),最后定容至1000ml,过滤灭菌后避光存(pH7.3)。
4.RNA凝胶上样缓冲液:
50%甘油、1mmol/L EDTA(pH8.0)、0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF。即2.5ml甘油、10μL 0.5 mol/L EDTA(pH8.0),1.25ml 1%溴酚蓝,1.25ml 1%二甲苯青FF,用DEPC处理水定容至5ml,分装后-70℃保存。
5.RNA胶(1%):
1g琼脂糖加62ml DEPC水,加热溶化后冷却至60℃,再加20ml的5×FGRB和17.8ml的37%甲醛,混匀后制胶。
6.甲酰胺(去离子):
将10ml甲酰胺和1g离子交换树脂混合,室温搅拌1h后用Whatman滤纸过滤,等分成1ml于-70℃贮存。
7.其他试剂:
37%甲醛、80%乙醇(利用DEPC处理水配制)。
三、蛋白质电泳
1.2.10%(M/V)过硫酸铵(APS):
1g APS加ddH2O至10ml。使用时尽量现配现用,4℃存则两周内用完,最多不能超过一个月。-20℃可存两个月,但一旦解冻后尽快用完。3.TEMED和DTT(dithiothretol):存放在4℃冰箱。4.30%胶母液(Acr-Bis):
30% Acrylamide、0.8%bis,即Acrylamide 30g、bis 0.8g定容100ml,可在4℃存放数月。
5.分离胶缓冲液(pH8.8):
6.浓缩胶缓冲液(pH6.8):1mol/L Tris,即Tris
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