草鱼生长激素与植酸酶的融合基因大量表达产物分析-论文答辩.pptVIP

内容提纲 研究背景及意义 实验方法及步骤 实验结果及分析 讨论 研究背景及意义 1.市场饵料添加剂污染严重且有富集作用，对人体有害。 研究背景及意义 2.草鱼生长激素参与鱼体生长代谢，能够加速蛋白质合成和脂类降解等生理功能。 研究背景及意义 3.植酸酶降低磷对环境的污染并消除植酸的抗营养作用，同时改善动物对蛋白质和矿物质等营养物质的利用率。 研究背景及意义 草鱼生长激素和植酸酶的融合基因的融合蛋白 促生长 √ 污染小 √ 高表达 √ 大量提取 √ 实验方法及步骤 100ml 250ml 500ml IPTG 恒温振荡培养箱 1.菌株培养 实验方法及步骤 2.蛋白样品制备 离心 超声波破碎 离心 沉淀 上清 PBS 实验方法及步骤 3.SDS电泳分析比较 4.蛋白纯化 5.蛋白定量 实验结果及分析 pET-28a H17 PHY HAP 实验结果及分析 H17 PHY HAP 28KDa 52KDa 80KDa 实验结果及分析 实验结果及分析 蛋白浓度H17 为1.55 mg/mL，PHY为 1.852 mg/mL，HAP 为1.414mg/mL，总共提取分别得到约H17 为7.75mg，PHY 为9.26mg，HAP 为7.07mg目的蛋白。 讨论 重组蛋白在大肠杆菌中的表达形式可分为三种： 1.胞外分泌表达， 2.周质空间表达， 3.胞内表达， HAP主要以第三种胞内表达为主，这种表达易形成无活性的包涵体，需要经过复杂的变性和复性才能得到有活性的蛋白。 当在大肠杆菌中大量表达外源蛋白时，表达的蛋白容易形成包涵体，不利于纯化及后续的酶活性检测或酶学性质研究。 讨论 提高重组基因表达蛋白HAP可溶性表达的方法： 1.选择适合的载体和宿主菌； 2.降低重组蛋白合成的速率； 3.改变培养基成分； 4.与分子伴侣或折叠酶共表达； 5.通过替换氨基酸增加可溶性等。