血清型与酶型 法医学.ppt

中山大学法医物证教研室 李建金 血清型的概念 人类某些血清蛋白具有遗传多态性，表型有个体差异，称为血清型（Serum types）。 在法医学鉴定中应用的血清型主要有：结合珠蛋白、维生素D结合蛋白、α1－抗胰蛋白酶、转铁蛋白、类粘蛋白、 α2－HS糖蛋白、纤维蛋白溶酶原、间－α－胰蛋白酶抑制因子、抗凝血酶Ⅲ、同种异型遗传标记以及部分补体蛋白等。 分类 分型原理 传统的免疫学方法 以特异性抗体检测同种异型抗原，可确定遗传标记的型别，如红细胞被动凝集抑制试验，酶联免疫分析，胶体金标免疫试验等。 电泳技术 法医鉴定中应用的血清型多数属于电泳性质上的多态性，需要采用凝胶电泳技术分型。不同表型的蛋白分子一级结构存在差异，分子量和等电点不同，在一定pH环境的凝胶中和一定的电场条件下，电泳迁移率不同，可依据蛋白谱带位置进行分型。 等电聚焦技术 依靠不同蛋白分子之间等电点差异进行分型，分辨率比常规凝胶电泳高，能够揭示许多普通电泳难以检出的多态性。 DNA分型技术也可用于血清型分型。 电泳后血清型谱带的显示可以用 普通蛋白染色：考马斯亮蓝R250,氨基黑10B和硝酸银染色等 免疫固定：利用抗原抗体的特异性反应识别特异性蛋白 免疫印迹法：是将凝胶中的蛋白转印制醋酸纤维膜上，在进行抗原抗体反应，利用标记在抗体上的酶或其他标记物显示抗原抗体复合物 结合珠蛋白（Haptoglobin） 一、生化性质及生物学功能 是一种血清糖蛋白，肝脏合成，PI： 4.1-4.2，可以结合Hb，形成Hp-Hb复合物，被网状内皮系统清除，利于Fe的再利用。保护肾脏。 Hp由2条α链和2条β链构成。Hp1和Hp2之间仅α链的一级结构不同，β链结构是相同的。 Hp1α链83氨基酸，分子量9kD；Hp2α链142氨基酸。 二、等位基因结构与命名 1、Hp基因：定位16q22.1，包含Hp基因及相关基因Hpr Hp1：含5个外显子，根据第4外显子中第52、53位密码子不同，分为Hp*1F（GAT，AAG）Hp*1S（AAT，GAG） Hp*2：含7个外显子，分为Hp*2FF，Hp*2FS，Hp*2SS三个等位基因 8mol/L尿素使Hp1-1分子中α链变性再用巯基乙醇还原后电泳，发现由Hp*1F；Hp*1S和 Hp*2三个共显性等位基因表达产物，有6种表型： 3、遗传Hp变异 Hp 0型 采用常规电泳技术检测不出Hp表型，又称无Hp血症。正常随机人群调查，中国汉族人群Hp 0型占0.81%。 原因： （1）溶血性贫血，特发性贫血，白血病，尿毒症 等，患者的血浆Hp含量明显下降。 （2）严重肝脏疾病如急性肝炎、肝硬化，Hp合成障碍。 （3）胎儿及部分新生儿。 （4）少数正常个体。 三、群体遗传学调查结果 四、分型及方法 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳： 利用PAG的分子筛作用和电场作用，Hp-Hb使联苯胺氧化变蓝，仅适用于新鲜血清中Hp Hp亚型等电聚焦电泳： 用DEAE-纤维素将Hp纯化，加尿素、裂解液、硫代乙酰胺，考马斯或免疫技术分型。 DNA分型： 利用链特异探针进行杂交分型，灵敏简便。 维生素D 结合蛋白 （vitamin D binding protein ） 2 基因结构 Gc基因定位4q12，基因长42.4kb，13个外显子，表达产物为含458个氨基酸残基的单一肽链。常见等位基因： Gc*2, Gc*1F, Gc*1S。 3分型  b 、免疫电泳 C、等电聚焦电泳技术可检出三个等位基因产物共六种常见表型 4、群体遗传学调查结果 血清类粘蛋白型(ORM) 1、生物化学性质与生物学功能 血清类粘蛋白（orosomucoid，ORM）是存在人类血液，体液，分泌液中一组具有遗传多态性的α1糖蛋白。由183个氨基酸残基组成的单一肽链，分子量41-43kD，PI 2.7~3.5。主要有ORM1和ORM2两种分子，二者间有21个氨基酸的差异。ORM1具有明显的遗传多态性。 生物学功能：属炎症急性相反应蛋白，具有免疫调节功能。 2、遗传及等位基因命名 ORM型的等电聚焦分型图谱 免疫球蛋白同种异型遗传标记 同种异型是免疫球蛋白上具有个体差异的抗原决定簇，由编码免疫球蛋白多肽链基因的等位基因所表达产生，表现为同一种属不同个体的免疫球蛋白抗原性不同，具有遗传多态性。 免疫球蛋白分子由四条多肽链组成，其中两条多肽链为重链，分别由450和（或）570个氨基酸组成；两条为