02 培养和显微.ppt

Chapter 2 Pure Culture Technology Microscopy  2.1 Isolate Pure Culture Technology Small in size is the basic character of microbes Colony form in studing and conserving Pure culture is the first step in microbiological study Pure culture result in repeatable outcomes 2.1.1 Aseptic technique Autoclave 2.1.2 Isolate and pure culture bysolid medium 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落（colony） 当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔（lawn） Pour plate method (稀释倒平板法) Spread plate method (涂布平板法) Streak plate method (平板划线法) Anaerobic culture method (厌氧培养法) Anaerobic Culture Methods Anaerobic jar Anaerobic chamber 2.1.5 Isolate by selective culture Encourages growth of desired microbe Assume a soil sample contains a few phenol-degrading bacteria and thousands of other bacteria Inoculate phenol-containing culture medium with the soil and incubate Transfer 1 mL to another flask of the phenol medium and incubate Only phenol-metabolizing bacteria will be growing 2.2 Observing Microorganisms Through a Microscope （1）Compound Light Microscopy 复式光学显微镜 Total magnification Resolution 对任何显微镜来说，分辨率是决定其观察效果的最重要指标。 从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制 （1）λ: 所用光源的光波波长，是影响最小可分辨距离的最主要因素。可见光光线的波长为400-700nm （2）θ: 物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离。 （3）n: 玻片（样品）与物镜间介质的折射率。 （4）n sinθ: 被称为数值口径（Numerical Aperture, NA)，它是决定物镜性能的最重要的指标。 （2）Darkfield Microscopy 暗视野显微镜 暗视野显微镜镜则利用特殊的聚光器实现斜射照明，给样品照明的光不直接穿过物镜，而是由样品反射或折射后再进入物镜，因此，整个视野是暗的，而样品是明亮的。 暗视野法主要用于观察生活细菌的运动性。 （3）Phase-Contract Microscopy 相差显微镜 相差显微镜使人们能在不染色的情况下比较清楚地观察到在普通光学显微镜和暗视野显微镜下都看不到或看不清的活细胞及细胞内的某些细微结构。 细胞各部分的折射率和厚度的不同，光线通过这种标本时，直射光和衍射光的光程就会有差别。随着光程的增加或减少，加快或落后的光波的相位会发生改变（产生相位差）。 相差显微镜配备有特殊的光学装置—环状光阑和相差板； 利用光的干涉现象，能将光的相位差转变为人眼可以察觉的振幅差（明暗差）； 从而使原来透明的物体表现出明显的明暗差异，对比度增强。 （4）Differential Interference Contrast（DIC）Microscopy 微分干涉差显微镜 偏振器将光源分解成偏振方向不同的两束光x和y。 聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。 最初两束光相位一致，在穿过标本相邻的区域后，由于标本的厚度和折射率不同，引起了两束光发生了光程差。 在物镜的后焦面处安装了第二个棱镜，它把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面（x和y）仍然存在。两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光，从