_glycosylase Structural thermodynamic and 尿嘧啶DNA糖基化酶的结构热力学和课件.ppt

Uracil-DNA glycosylase: Structural, thermodynamic and kinetic aspects of lesion search and recognition. Zharkov DO , MechetinG V, Nevinsky GA. Introducción. Nucleótidos Gasto metabólico Desaminación espontánea DNA glucosilasa uracil N-glucosilasa Elimina los uracilos del DNA. Reparación por escisión (sustituidos por C). Función durante la replicación. dUTP intermediario dela síntesis de dTTP. DNA de nueva síntesis con U (sustituido por T). DNA fragmentado (fragmentos de Okasaki) Reparación por escisión de bases Base da?ada Hidrolisis Eliminación (endonucleasa). Reparación (DNA polimerasa y ligasa) Los desoxirribonucleótidos Poseen la misma estructura que los nucleótidos. Una base nitrogenada (un compuesto cíclico con átomos de nitrógeno) Un grupo fosfato Una pentosa (monosacárido de cinco carbonos), en este caso la desoxirribosa. La diferencia entre un ribonucleótido y un desoxirribonucleótido? desoxirribosa ribosa Susceptible a hidrólisis DNA glucosilasa uracil N-glucosilasa Desaminación de citosina e incorporación de dUTP. Búsqueda y reconocimiento de la UNG. Como encontrar las lesiones? Estructural Termodinámica Cinética Hidrólisis de enlace N-glucosídico de desoxiuridina en ADN. Aspectos estructurales Cuatro hojas-β entre dos pares de α-hélice. Surco con carga positiva. Unión sustrato del ADN Bolsillo para la unión del uracilo. Cambio conformacional Después de la escisión de U Complejo de Reconocimiento Temprano No Específico. (Thd) Complejo de reconocimiento tardío. Específico Estudios termodinámicos y cinéticos. Dependencia de la afinidad de hUNG por ADN simple o doble. Análisis de aditividad de unión ADN-enzima. La energía de enlace es aditiva con respecto a la longitud de los oligo-desoxirribonucleótidos (ODN). hUNG posee solo un sitio de unión especifico para uracilo. Contribución de un contacto. Ligando Misma cantidad de energía de enlace. pi Estudios termodinámicos y cinéticos. Análisis de afinidad de la enzima. 1.46 (C uni