《微生物化学实验指导》课件_第四章 微生物的生化试验和血清学试验（化学工业出版社）.ppt

3、结果观察与记录 如凝块全部溶化,为阳性+， 凝块24 h仍不溶化,为阴性- （三）卵磷脂酶试验 1、原理： 某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存在时，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌落周围形成不透明的乳浊环或混浊白环，或使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌。 2、试验方法 （1）卵黄平板法： A法： 将待检菌培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，36±1 ℃培养3～ 6h，观察结果。 菌落 白色混浊环， B 法： 先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半，置于36 ℃待干后，将待检菌接种于未涂抗血清的一半卵黄琼脂平板上，再转划已涂过抗血清的一半，36±1 ℃厌氧培养24～ 48h，观察结果。 在未涂抗血清的一半平板上，菌落周围形成较大的不透明乳白色混浊区，在涂抗血清的一半平板上，菌落周围无不透明混浊区，为阳性。 两边均无不透明区，为阴性。 菌落周围 无混浊白环 菌落周围 有混浊白环 乳糖卵黄琼脂平板,借以确定该菌可否产生卵磷脂酶。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相应抗血清所抑制， （2）卵黄盐水法 将庖肉培养基培养物经除菌过滤，收集滤液。在两支灭菌试管内，每管加入1%卵黄盐水0.4mL,在一管中加入滤液0.2mL，另一管加入生理盐水0.2mL作对照。在36 ℃ 水浴中，经2h、 4h、 8h、 24h观察结果。 管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。 3、结果观察与记录 菌落周围形成较大的不透明区，为阳性。 两边均无不透明区，为阴性。 管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。 两管无沉淀者，为阴性。 （四） 血浆凝固酶试验 1、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象,为阳性。 2、试验方法 （1）玻片法： 取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5 min内,如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，则为阳性;如两者呈均匀混浊，无凝固则为阴性。 有凝块 均匀混浊 血浆 生理盐水 血浆凝固酶试验 （2）试管法 取灭菌小试管3支，各加入血浆①－无菌水(1:1)0.5ml，1支加入被检菌株的营养肉汤培养液（或浓菌悬液）0.5ml；其余2支作对照管，1支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml作阳性对照;另1支加入营养肉汤或0.9％氯化钠溶0.5ml作空白对照。将3管同时放37℃温箱或水浴中培养，每0.5 h观察一次， 4 h 内无凝固现象者，观察直至24小时。 3、结果观察与记录 斜面有菌苔生长，培养基斜面变为蓝色或深蓝色，为阳性，记+； 无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者，为阴性，记- 枸椽酸盐试验原理及斜面照片 阳性+ （二） 丙二酸盐利用试验 1.原理: 某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培养基变为碱性,培养基由草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴别细菌。 2、试验方法 取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸钠培养基上，于36±1 ℃培养48h，观察结果。 3、结果观察与记录 培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,记+; 培养基无颜色变化,为阴性,记- 五、 呼吸酶类试验 氧化酶试验 过氧化氢酶试验 硝酸盐还原试验 氰化钾试验 （一） 氧化酶试验 1.原理: 氧化酶使细胞色素C氧化后，氧化型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺氧化，使生成玫瑰红色到暗紫色的醌类化合物,再和α-萘酚结合,生成吲哚酚蓝,呈蓝色反应，为阳性。 试剂 1% α-萘酚-乙醇液 1%盐酸二甲基对苯二胺 2、试验方法 用滴管直接滴加1%盐酸二甲基对苯二胺试剂1~2滴在培养物上,再加入1% α-萘酚-乙醇液1~2滴, 在30秒内判定试验结果。 3、结果观察与记录 在30秒内呈蓝色反应,为阳性,记 + 不变色或为红色者,为阴性,记 - 成蓝色为+ 不变色或为红色为- （二） 过氧化氢酶试验 1.原理： 某些细菌可分泌过氧化氢酶，加入过氧化氢后，可将过氧化氢分解生成水和氧气，产生气泡，即为阳性反应。 2、试验方法 挑取固体培养基上的新鲜菌落一环，置于洁净玻片上（或试管），滴加3%过氧化氢液数滴，或在琼脂斜面培养物上直接滴加过氧化氢液，立即观察结果。 3、结果观察与记录 产生气泡者，为阳性，记+ 不产生气泡者