丝裂霉素及氟尿嘧啶对人肝癌smmc7721细胞株的细胞毒作用课件.ppt

奈达铂与阿霉素、丝裂霉素及5-氟尿嘧啶对人肝癌SMMC7721细胞株的细胞毒作用 奈达铂是一新型铂类抗肿瘤药，其与顺铂相比具有肾毒性和胃肠道副反应较轻等优点。Muramatsu等对犬的研究表明，经肝动脉给药时奈达铂有相对低的肝排出率，认为比顺铂更适于动脉灌注。但目前尚缺乏奈达铂对人肝癌细胞的研究资料。 目的：研究奈达铂对人肝癌SMMC7721细胞株的细胞毒作用及其与阿霉素、丝裂霉素及5-氟尿嘧啶的相互作用。 材料与方法 细胞株 为人肝癌SMMC7721细胞株，引自上海细胞研究所，常规传代培养。 药物与试剂 奈达铂（南京东捷药业有限公司，批号；顺铂（江苏豪森药业股份有限公司，批号：030801）；阿霉素（日本明治医药有限公司，批号：960202）；丝裂霉素（浙江海达药业股份有限公司，批号：030303）；5-氟尿嘧啶（南通制药厂，批号031202），四氮甲唑蓝（MTT）系Merk公司产品 实验方法 取处于对数生长期的SMMC7721细胞，用0.25%胰酶消化后，以含10%灭活小牛血清，2mmol/l谷氨酰胺，4万U/L庆大霉素的PRMI1640培养液调至1×105/ml，加入96孔板（Nunc产品），每孔100μl，置37℃，5%CO2条件下培养24小时，然后按嵌套设计，加入不同浓度的药物100μl（每种浓度3个复孔），以单纯培养液为对照，继续在上述条件下培养48小时，每孔加入MTT溶液50μl，再培养4小时后弃去上清，每孔加入100μl二甲基亚砜，震荡5分钟后用酶联免疫测定仪在波长570nm处测定各孔的光密度（OD）值，按下列公式计算细胞毒指数（CI）： 细胞毒指数CI=（1-实验孔OD均值/对照组OD均值）×100% 用Karber法计算奈达铂对SMMC7721细胞的半数抑制剂量（IC50）。 统计学处理 奈达铂与对SMMC7721细胞CI的关系用直线相关分析；联合用药与单纯用药的比较采用t检验，数据用SPSS 11.5软件处理。 结 果 单纯奈达铂对SMMC7721细胞株有抑制作用（IC50为20.1μg/ml），其CI与药物浓度呈正相关。 顺铂对对SMMC7721细胞株有抑制作用（IC50为13.7μg/ml），其CI与药物浓度呈正相关。 Suppression of nedaplatin combined with adrimycin on SMMC7721 cell(OD,x±s) Suppression of nedaplatin combined with mitomycin on SMMC7721 cell(OD,x±s) Suppression of nedaplatin combined with mitomycin on SMMC7721 cell(OD,x±s) 结论 奈达铂与阿霉素、丝裂霉素或5-氟尿嘧啶联合应用在一定剂量范围内呈现协同效应，可联合用于肝癌的治疗。 * * **为P0.01与单用阿霉素比较；括号内为CI 0.26±0.01(66.2%)** 0.33±0(57.1%)** 0.39±0.012(49.4%)** 0.4±0.02(48.1%) 20 0.27±0.01(64.9%)** 0.46±0.017(40.3%)** 0.51±0.006(33.8%)** 0.54±0.02(29.9%) 10 0.28±0.006(63.6%)** 0.45±0.015(41.6%)** 0.54±0.006(29.9%)** 0.58±0.017(24.7%) 5 0.37±0.012(51.9%) 0.58±0.012(24.7%) 0.72±0(6.5%) 0.77±0.006 0 4.0 0. 4 0.04 0 阿霉素（μg/ml） 奈达铂 μg/ml **为P0.01与单用丝裂霉素比较；括号内为CI 0±0(100%) 0.14±0.01(81.6%) 0.26±0.012(65.8%)** 0.39±0.01(48.7%) 20 0.003±0.006(99.6%) 0.12±0.01(84.2%) 0.29±0.006(61.8%)** 0.50±0.006(34.2%) 10 0.007±0.006(99.1%) 0.14±0.026(81.6%) 0.29±0.01(61.8%)** 0.53±0.015(30.3%) 5 0.003±0.006(99.6%) 0.15±0.01(80.3%) 0.35±0.006(53.9%) 0.76±0.01 0 100 10 1 0 丝裂霉素 （μg/ml） 奈达铂 μg/ml **为P0.01与单用丝裂霉素比较；括号内为CI 0±0(100%) 0.14±0.0