流感快速诊断方法及试剂盒技术指标参数综述课件.ppt

流感快速诊断方法及试剂盒技术指标参数综述 高荣保 中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所 国家流感中心 1 背 景 流感的爆发和流行正威胁着全球公众的健康，特别是近期在全球多个国家出现多次人感染A/H5N1禽流感病毒以后，这预示着甲型流感病毒出现流行爆发的可能。因此WHO正在强调加强流感的监测的工作，并强调要提高实验室检测诊断流感的能力，以及要及早的发现流行病毒株。 2 流感病毒感染不能仅仅依靠临床症状进行诊断，因为依靠临床特征很难区分呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒、冠状病毒、偏肺病毒以及其他相关呼吸道病毒引起的流感样病例。因此流感病毒的实验室检测给临床及时地诊断和治疗提供信息，此外，对于公共健康反应和政府应急处理也提供依据。 3 实验室检测 抗原检测：快速诊断检测（快诊）、 IFA、HA、ELISA 病毒分离：细胞、鸡胚 核酸检测：RT-PCR、Real-time RT-PCR、NASBA、MDD 血清学检测：HI、ELISA、IFA、SRH、MN 4 Comparison of diagnostic techniques for human influenza virus infection 5 实验室检测决策 两大挑战： 流感监测中对新病毒株的确认（如H5N1） 在不同的流行阶段诊断策略的决定 6 流行早期阶段 重点在于控制和预防，此时高灵敏度的检测手段（如流行株特异性核酸检测）是优先被选择的，目的在于发现起始病例或病例群，以便能够及时地进行抗病毒治疗和制定相应的预防策略。 实验室检测决策 7 流感已经广泛流行期间 此时的重点在于临床病例的确认，进而防止在医院内进一步传播扩散，因而此时实验室检测可以采用免疫荧光、快速抗原检测（快诊）等技术进行病例诊断，并且在有可能的情况下进行耐药性检测。 实验室检测决策 8 快诊是WHO推荐使用的快速检测方法之一 9 快诊检测 基于流感病毒抗原检测的快速诊断方法 胶体金法 免疫印迹ELISA （Dot ELISA）法 NP抗原 M抗原 双抗体夹心法 10 胶体金法原理 11 斑点-ELISA（Dot-ELISA）的特点 以吸附蛋白质能力很强的硝酸纤维素膜为固相载体； 底物经酶反应后形成有色沉淀，使固相膜染色。 12 13 快诊方法的特点 操作简单 快速（30min） 结果容易判断和解释 无仪器设备需求，可用于疫情现场检测 FluA和FluB 不能进行亚型的鉴别 14 标本及要求 鼻拭子 鼻咽拭子 鼻咽部吸取物 鼻洗液 咽拭子 支气管吸取物 支气管灌洗液 15 标本在临床发病的早期采集（96小时内）。 成人采集鼻、咽拭子，并且在采集鼻拭子时，要尽可能的深入采集。 三岁以下的儿童在保证安全的情况下采集鼻咽部分泌物。 标本及要求 16 快诊的应用价值 感染病例的处理：辅助流感病例的临床治疗策略和医院处理方案的制定。 爆发疫情的处理：有助于对爆发疫情的预防控制制度的建立。 公共健康：在流感爆发期间，对于公共场所（如商业区、旅游区）的人群健康，快速诊断将提供有效的信息以供控制方案的制定，提供有效的公共健康建议。 17 快诊的应用价值 监测：为社会公众提供流感活动情况的“早期预警”系统.在一些国家快速检测已经被应用流感的监测形成制度，被用于病毒分离前的标本筛选。但是WHO要求对流感进行抗原分析，不推荐把快速检测作为监测的单一手段。 18 快诊检测的局限性 在季节性流感或爆发流感疫情开始阶段，阴性结果不能作为临床治疗或控制策略的依据，由于阴性结果不能排除没有流感病毒感染，此时采用免疫荧光检测、病毒培养或PCR等确认实验是需要的。 19 快诊检测的局限性 快速检测不能提供甲型流感的亚型信息，因此不能区分感染H5、H7、H9等禽流感亚型病毒，CDC系统需要对这些流感病毒亚型进行特异性检测。 对成人标本检测的灵敏度要低于儿童，因为儿童出现保护性免疫的时间更长。 20 网络实验室使用快诊检测的建议 快速检测在流感监测中应该被最优化使用 在流感低活动期间，快速检测阳性结果必须通过免疫荧光、病毒分离培养或者RT-PCR等方法的复核来说明和发出警示。 21 快诊检测的应用建议 在流感流行季节或流感爆发初期，快诊检测可以给临床诊疗和处理策略提供有效信息。 在季节性流感爆发高峰期，可适当使用使用快诊检测进行病毒分离前标本的筛选。 快诊检测方法在高致病性禽流感感染诊断中不被推荐。 使用前需要适当的培训。 22 技术参数 金标准：通常为病毒分离 灵敏度（sensitivity)：“真”阳性检出率（70~75%）——假阴性。灵敏度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100% 特异度(specificity)：“真”阴性检出率（90~95%）假阳性——