第四章 海洋真菌.ppt.ppt

八、海洋真菌的意义 （1）海洋真菌与海洋细菌一样﹐参与海洋有 机物质的分解和无机营养物的再生过程﹐为海洋植物不断提供有效营养﹐在海洋食物链中占有重要位置。特別是在海洋沉积物中的真菌菌丝体和酵母菌体﹐为海洋原生动物﹑底栖动物等提供了饵料的来源。 （2）某些海洋真菌能产生抗菌素和其他生理活性物质﹐在生态和应用方面有重要意义﹐如降解海洋环境中的污染物﹐促进海洋自净等。 （3）利用海洋真菌加工麦麸﹑甘蔗渣﹑ 稻草等﹐制成廉价的微生物碎屑混合物﹐用作水产养殖中的饲料。 第五章 海洋真核微藻 海洋微藻包括海洋中不能游动的单细胞的和丝状体的真核海藻、微藻鞭毛藻、微浮游藻等。 体积较小(0.2 – 500um），数量巨大，广泛存在于海洋中，是海洋生态系统的初级生产者。 一、海洋真核微藻的特点 由于个体小、比表面积大、代谢活性高、生长繁殖快、倍增时间短（仅1d左右）、易于培养，而可获得大量的藻体，其生物多样性极高，全世界水生微藻的总种类数超过10万种，其中海洋微藻的总种类数可能也多达几万种（目前已被认证的有4 000 -- 5 000种）。 二、海洋微藻的分布 海洋微藻的分布环境与蓝细菌相似，以浮游状态或底栖状态分布于海洋。 有些微藻以内生体的形式存在于海洋动物与巨型海藻组子组织中，很多种类的微藻以共生形式存在于海洋无脊椎动物中，许多无脊椎动物产生的代谢产物也可能与内共生微藻有关。 三、海洋微藻的分离和培养 1. 样品采集 水体中的微藻可直接采集海水，通过过滤（滤膜孔径0.6um）可富集微藻； 对于较大的浮游微藻可用浮游生物网（孔径10um）采集和浓缩，这对于海洋水体中，数目稀少的较大的微藻有用。 水表漂浮的微藻可用无菌的平板将表层海水转人无菌容器中获得。 对于生活在生物或非生物结构表面的微藻，可用无菌小刀将微生物的表面膜刮下，也可将琼脂平板压在微生物定居的表面上。 底栖型微藻可用载玻片收集，将载玻片放于水体底积物中一段时间，让附着型微藻定居在上面。 沉积物中的藻也可采用将沉积物铺于琼脂平板表面的方法或将沉积物悬液涂布于分离平板。 空气中的微藻可用敞开的液体培养基或平板收集。 微藻寄生的较小的植物和动物可潜水获得，浮游动物可用网收集。 ※样品采集后必须在最短时间内进行观察，鉴定和分离，因为有些重要的藻体在几小时后就开始解体，导致样品中藻类多样性下降，仅少数种类存活下来。 2. 培养基 ① 培养基用水 对于海洋微藻来说，从开放海洋表面收集的海水比人工海水的效果好，因为配制海水的盐中有一些污染物。 采集的海水通过活性炭吸附可除去海水中的有毒物质及有毒金属而提高水质。 一般来说，远离陆地的远洋海水清澈且不含抑制物质可直接配制培养基。 聚乙烯容器盛装的海水放置几个月后，海水中的抑制物质减少，可适于配制培养基。 ② 培养基灭菌 海洋微藻可在固体表面生长，通常采用0.5％-- 2％的高纯度琼脂，琼脂和培养基应该分开灭菌，因为琼脂高压下会产生部分有毒的分解物 。 一般采用10 ％ （5％-- 20％）的水琼脂与9倍的培养基分开灭菌，然后1份培养基加入1份水琼脂中，混匀后制作平板。 有些微藻种类在琼脂表面生长不好，但加入 100 ～500ug/L的表面活性剂如Tween-20， Tween-80， Triton X-100可促进生长，很可能是降低表面张力的作用。 3. 常用培养基 ① ERDSCHREIBER培养基（Starr，1964） 配方 过滤海水：1000m1 土壤浸液：50m1 NaNO3：0.2g Na2HPO4·12H2O ：0.03g 土壤浸液制备方法 取没有施用化肥或农药的花园土在三角瓶（1L）底部铺上lcm厚的土层，随后加入1L蒸馏水，高压灭菌30min后，静置24h，倾出上清液即可使用。 配制方法 第一天，用一号滤纸过滤海水，然后加热至73℃。 第二天，将海水第二次加热到73℃并将盐贮备液灭菌。 第三天，将冷却后的盐贮备液加入土壤浸液中，混匀后加入冷却后的海水中即可。 ② VON STOSCH加富培养基（Stosch，1964） 配方 1020m1海水中各种盐的含量见表2-2 配制微量元素贮备液 50g EDTA和31g KOH溶于1L蒸馏水中（也可采用50g Na2EDTA）。 4.98g FeS04·7H20与1 mlH2SO4溶于1L蒸馏水中。 11.42g H3B03溶于1L蒸馏水中。 1L蒸馏水中溶解 ZnSO4 · 7H2O：8 .82g； MnC12·4H2O ： 1.44g； MoO3 ： 0.71g； CuSO4·5H2O ： 1.57g； Co(NO3)2·6H2O ： 0.49g。 上述4种微量元素液各1 ml加入1L人工海水