HBV DNA检测在乙肝治疗中应用.ppt

为什么进行HBV DNA检测 HBV DNA检测带给我们的益处 目前HBV DNA的检测方法 罗氏COBAS Amplicor系统的优点 新一代技术COBAS TaqMan 乙型肝炎：全球性的健康问题 目前HBV携带者超过 350 million 25–40% HBsAg 阳性人群会死于肝硬化或肝癌 全球350 million HBV 携带者, 75% 在亚洲  慢性乙肝检测指标 HBsAg – 确定慢性乙肝 HBeAg/ anti-HBe – 区分感染的不同时期 HBV 聚合酶 – 检测病毒的酶活性 HBV DNA – 检测病毒载量 (病毒转录活性) HBcAg – 检测病毒蛋白 (病毒翻译活性) HBV 病毒基因 慢性乙型肝炎 慢性乙肝的三种临床表现 HBeAg 阳性慢性乙肝 HBeAg, ALT升高, HBV-DNA 107 to 1011 拷贝每毫升 ， 病理切片指征明显 HBeAg 阴性慢性乙肝 Anti-HBe, ALT升高 ， HBV-DNA 104 to 108拷贝每毫升 ,病理切片指征明显 HBsAg 阴性携带期 Anti-HBe, ALT正常, HBV-DNA 101 to 104拷贝每毫升 ,病理切片变化极小 HBV保持复制活性（HBV DNA≥105 copies/mL）,转氨酶3－6月内持续升高，建议进行治疗 对于e抗原阳性的慢性乙肝患者而言，采用干扰素治疗结束后，应该检测e抗原、e抗体和HBV DNA水平，并且每6个月评估病毒学反应 对于e抗原阴性的慢性乙肝患者而言，在经过抗病毒治疗后，检测血清HBV DNA水平是评估病毒学反应的唯一方式 HBV-DNA 血清阳性病人，如果ALT 2ULN, 要考虑治疗 治疗期间， ALT、 e抗原和HBV-DNA至少每3个月检测一次 抗病毒一般适应症主要指标：HBV DNA ≥105 拷贝/mL 病毒学应答重要指标包括血清HBV，DNA 检测不到 (PCR 法)或低于检测下限，或较基线下降≥2log10 为什么进行HBV DNA检测 HBV DNA检测带给我们的益处 目前HBV DNA的检测方法 罗氏COBAS Amplicor系统的优势 新一代技术COBAS TaqMan HBV DNA检测带给我们的益处 监测抗病毒治疗效果 早期确定病毒学应答预测治疗后反应 (HBsAg 消失) 预测耐药突变 预测肝移植后复发 检测HBsAg 携带者的病毒的活动情况 经治疗生化指标正常病人中病毒清除率 监测抗病毒治疗，预测耐药 HBV DNA 载量显示携带者处于活动或非活动状态 HBV DNA载量在肝移植中的应用 在肝移植中 (Liver Transplantation) 为防治肝移植后的复发所采取的预防性治疗需要达到HBV DNA104 copies/mL 的指标 为什么进行HBV DNA检测 HBV DNA检测带给我们的益处 目前HBV DNA的检测方法 罗氏COBAS Amplicor系统的优势 新一代技术COBAS TaqMan 目前HBV DNA的检测方法 罗氏COBAS Amplicor HBV Monitor Digene Hybrid Capture 杂交捕捉 Abbott Genostix 已消失 Bayer bDNA 3.0 国产HBV DNA检测试剂及方案 罗氏COBAS TaqMan HBV monitor 灵敏度比较 Branched DNA (bDNA) 国内Real time方法 HBV 的检测现状 模板扩增 实时荧光定量模式 需要关注的国内实时荧光PCR检测的问题 仪器90％源于进口，ABI、ROCHE、Bio-Rad… 试剂100％国产，匹基、达安、科华、复星… 需要关注的国内实时荧光PCR检测的问题 目前国内使用的进口Realtime PCR仪全部是针对科研用途研发的，缺乏临床诊断所需的质控系统 所有进口PCR仪均为开放系统，除Roche外均不提供临检用试剂 仪器厂家仅负责仪器运行是否正常，不对检测结果做任何保障 需要关注的国内实时荧光PCR检测的问题 均采用外部标准曲线定量，标准品为重组质粒，与临床标本有无差异－－？ 质控品及标准品有无朔源性－－？ 试剂是否标明“域值”或“Cross Band” 取值范围－？ 阳性质控是否给出标准值范围－－？ 标准品浓度是否覆盖声明的检测灵敏度－－？ 是否提供内部质控品－－？ 纯化产率如何控制－－？ 检测结果标准化的问题 为什么进行HBV DNA检测 HBV DNA检测