化瘀祛痰对高尿酸血症大鼠肾脏有机阴离子转运蛋白作用.ppt

上海市教育委员会科研创新项目 ( No.08YZ62) 化瘀祛痰对高尿酸血症大鼠肾脏有机阴离子转运蛋白的作用 一、国内外研究的新进展 流行病学调查 西药治疗 肾脏对尿酸盐的排泄过程 化瘀祛痰法与尿酸排泄的机制思考 课题思路 动物实验及分组 二、研究工作主要内容 各组大鼠尿尿酸及24h尿酸总排泄量的的比较 肾组织HE染色 光镜下正常组大鼠肾组织结构正常(图1,2)；模型组大鼠偶见局部肾近曲小管上皮细胞肿胀，空泡变性，肾间质充血，炎细胞浸润，肾小球未见明显异常(3,4)；中药组(图5)及苯溴马隆组(图6)肾小球无明显变化，肾间质炎细胞浸润程度减轻，肾近曲小管上皮细胞肿胀及空泡变性减轻。 常规透射电镜下观察显示，正常组大鼠肾小管上皮细胞线粒体丰富,呈椭圆或棒形,嵴结构清晰,肾小管上皮微绒毛结构清晰完整,肾小球滤过膜结构完整清晰。（图1,2） 模型组可见到部分肾小管上皮细胞肿胀，空泡变性，线粒体肿胀，表面微绒毛脱失。(图3，4) 中药组（图5）及苯溴马隆组（图6）肾小管上皮细胞肿胀和空泡变性减轻，线粒体肿胀减轻，表面微绒毛无脱失。 病理结果分析 虽然造模后大鼠肾小球形态未见异常，肾功能也未见异常，肾小管功能指标尿β2-MG也未见异常，但造模后肾组织已有轻微损伤，但尚未影响相关生化指标。 提示高尿酸血症早期也存在肾组织病理损伤，病变持续发展将可能出现尿酸性肾病的病理阶段，提示单纯性高尿酸血症也应该及早干预以减少病理损害。 同时表明化瘀祛痰复方在降低血尿酸的同时还可以改善高尿酸血症模型大鼠肾小管间质病理损害的程度。 rOAT1蛋白表达 rOAT3蛋白表达 rOAT1/rOAT3蛋白表达 结论 应用酵母粉灌胃合并氧嗪酸钾腹腔注射的方法成功建立了高尿酸血症大鼠模型，更接近于人类原发性高尿酸血症的发病模式，目前该种方法在国内外尚未见报道。 该种高尿酸血症模型对于单纯性血尿酸升高的原发性高尿酸血症的研究更为适用。 化瘀祛痰复方可降低血尿酸水平并促进尿尿酸的排泄。 结论 化瘀祛痰可降低血清黄嘌呤氧化酶活性，可能为其降低血尿酸水平的机制之一。 化瘀祛痰可上调肾脏尿酸转运蛋白rOAT1、rOAT3的表达，从而促进近端小管对尿酸的分泌而降低血尿酸。也即证实肾脏尿酸代谢调节的机制与中医化瘀祛痰治法相关。为研发治疗高尿酸血症的新药提供了理论依据。 敬请提出宝贵意见 * * LOGO 健康人血清尿酸值 男性150~380μmol/L 女性100~300μmol/L 原发性高尿酸血症 高嘌呤食物饮酒、剧烈运动会一过性上升．在通常饮食下1~2周内重复测定2~3次,若持续超416μmol/L 嘌呤代谢紊乱 尿酸排泄减少 高 尿酸血 症 痛风 结石 糖尿病 高血压 冠心病 高脂血症 肾功能不全 终末期肾脏病 肾功能进展的独立危险因素 寻求新的途径 来有效治疗高尿酸血症 肾间质 明显损害 苯溴 马隆 别嘌 呤醇 西药 肾小球 100%滤过 大部分在近端 肾小管被重吸收 少部分又被重 新分泌入肾小管腔 滤过 重吸收 分泌 原发性高尿酸血症主要病因 尿酸排泄减少 占90% 主要原因 重吸收增加 分泌减少 肾脏有机阴离子转运蛋白OAT1、OAT3在 肾小管对尿酸的分泌中起着关键的作用 尿酸盐为极性分子，不能自由通过细胞膜，因此其在近曲肾小管的重吸收和分泌过程有赖于离子通道。目前已发现有机阴离子OAT1和OAT3均参与了近曲肾小管对尿酸盐的转运，负责将尿酸从管周毛细血管转运到肾小管上皮细胞内，完成尿酸分泌的第一步。 临床及实验研究 机制研究思路 化瘀祛痰复方 临床取得较好疗效 何立群教授申请得到了国家知识产权局发明专利 车前子利水涤痰 留行子通络逐瘀 白芥子化痰散结 冬葵子活血利水 化瘀通络 祛痰降浊 中医化瘀祛痰法组成的复方可以促进尿酸排泄，推测化瘀祛痰机制与促进肾小管对尿酸的分泌有关。本课题在分子水平证实这一构想 OAT1 OAT3 化瘀祛痰法 体内实验 目的：以“化瘀祛痰”为治法的中药复方矢志方在有效调节高尿 酸血症大鼠尿酸代谢的基础上，探索其促进尿酸排泄 的主要分子机制是否通过调控肾脏有机阴离子转运蛋白 OAT1、OAT3的蛋白表达而促进肾小管对尿酸的分泌。 肾小管对尿酸分泌 的分子机制 正常组 1 模型组 2 中药组 3 苯溴马隆组 4 酵母粉灌胃合 并氧嗪酸钾腹 腔注射两周 治疗两周 病理状况 常规透射电镜 血清黄嘌呤氧化酶（XOD）活性 OAT1蛋白表达 OAT3蛋白表达 及酶活性各组生化 UA、S