多聚甲醛 4 多聚甲醛配置.docVIP

多聚甲醛 4%多聚甲醛配置 4%多聚甲醛配置： （4%是指4g多聚甲醛固体溶于00mL PBS中） 1. 先配好PBS 2. 称取4g多聚甲醛固体 3. 将多聚甲醛放入PBS中水浴锅65加热3h 注意：1.先配现用，多聚甲醛容易挥发。上午使用，前一天下午配置；下午使用，当天上午配置。 2.多聚甲醛有毒，使用时要在通风橱中进行并配戴口罩 40g多聚甲醛固体→1L PBS 120g多聚甲醛固体→3L PBS 药品 PBS NaCl KCl Na2HPO4 12H2O KH2PO4 加三次水，1L定容 取50只小鼠，1只小鼠注射20mL 4%的多聚甲醛溶液，共需1000mL≈，故要配置 1、5L的4%的多聚甲醛溶液 用量 1L 8g 0.2g 2.88g 0.2g 从组织中提取总蛋白 组织匀浆 8mL裂解液 8mL RIPA+80μL PMSF（100×）+190.5μLcocktail（100×） 1mL RIPA+10μL PMSF（100×）+23.8μLcocktail（100×） 1. 裂解：取少量组织+600μL裂解液匀浆→4振荡裂解45min→4离心12000r/min，离心15min 2. 稀释：取3μL上清+27μL无菌水→BCA试剂盒 以A液：B液=50：1的比例混合→样品25μL+混合液200μL（设置三组平行对照） 温敷：37下温敷30min→570nm下检测OD1.0左右→测蛋白浓度， 计算50μg/70μg对应体积和buffer体积→5×buffer，最大上样量 ÷4=buffer体积 3. 变性：100煮沸10min，-80保存 组织总RNA提取 取小鼠肝组织50~100mg,加人1mL TrizolTM试剂,置于碾钵中快速研磨,样品体积不超过TrizolTM的10%。匀浆后的样本于室温孵育5min(使核蛋白复合物完全融解),再加人0.2mL氯仿,盖好样本管盖,用手剧烈振荡15s后室温静置3min；4下,12000r/min离心15min(离心后混合物分为下层红色的酚、氯仿相,中间相和无色的上层水相。RNA分布于上层水相,水相占总体积60%。取上清液转人另一样品管,并加人0.5mL异丙醇,混匀后室温放置10min；4下,12000r/min离心10min。弃上清液,并用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的双蒸水(ddH20)配置的75%乙醇1mL洗涤沉淀物,振摇后沉淀。然后在4下,7500r/min离心5min。真空干燥5~10min或吸尽乙醇开盖挥发,弃上清液，敞开关口,凉干沉淀;最后溶沉淀于50uL RNase-free ddH2O中。-70保存。 百度有哪些信誉好的足球投注网站“就爱阅读”,专业资料、生活学习,尽在就爱阅读网92,您的在线图书馆! 3