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2018-06-15 发布于福建
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实验5 血清三酰甘油测定

血清三酰甘油的测定 * * 生物化学与分子生物学学科 2.了解血清三酰甘油的测定的临床意义。 1.掌握血清三酰甘油的测定的基本原理和方法。血清三酰甘油的测定一、实验目的血清三酰甘油的测定 1.器材试管及试管架、混匀器、恒温水浴箱、微量加样器、吸量管、吸耳球、可见光分光光度计、比色杯、记号笔。 2.试剂 (1)新鲜血清 (2)抽提剂为正庚烷—异丙醇(2∶3.5)(V／V) (3)40mmol/L H2SO4溶液 (4)异丙醇 (5)皂化剂 (6)氧化剂 (7)乙酰丙酮 (8)1.1mmol/L三油酸甘油酯标准液二、器材和试剂甘油三酯(TG) 甘油磷脂 (PL) 胆固醇酯(CE) FA 胆固醇 FA FA FA 甘油 FA FA Pi O-X 甘油三、实验原理血脂 FA = Fat Acid X = 胆碱乙醇胺丝氨酸肌醇等三、实验原理三、实验原理血清三酰甘油的测定三酰甘油甘油磷脂正庚烷异丙醇-水上层液0.4ml 抽提三酰甘油 KOH 65℃ 5 min 脂肪酸钾甘油 + + HIO4 + NH4+ 甲醛乙酰丙酮 3,5-二乙酰-1,4二氢-2,6 二甲基吡啶（黄色带荧光）甘油甲醛皂化氧化显色 3 2 15 min 血清三酰甘油的测定 OH 甲酸 0.6 0.6 0.6 40mmol/LH2SO4(ml) 2 2 2 抽提剂（ml） — 0.2 — 标准管 — 0.2 蒸馏水（ml） — — 标准液（ml） 0.2 — 血清（ml）测定管空白管试剂四、实验步骤取3支小试管，按下表操作，边加边摇，混匀器振摇10min，静置分层。抽提皂化吸取上层液体0.3-0.5ml，加入对应的3 只大试管（三管液量相等），再加异丙醇2ml及皂化剂0.4ml，立即摇匀，于65℃保温5min 氧化显色各管加入氧化剂2ml充分混匀后，加入乙酰丙酮试剂2ml，摇匀，65℃水浴15min 比色取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度 *