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应用聚合酶链式反应扩增技术鉴定新生大鼠的性别 作者：常欣魁 辅导教师：林媛媛 李万成 学校：北京市顺义牛栏山第一中学 二○一二年十二月 目 录 摘要--------------------------------------------------------------------------2 一、选题背景-------------------------------------------------------------------3 二、研究目的、意义、路线和创新点 ------------------------------------------------4 三、研究材料与方法 -----------------------------------------------------------6 1、仪器和试剂-------------------------------------------------------------6 2、实验动物---------------------------------------------------------------6 3、基因组DNA的提取-----------------------------------------------------6 4、PCR扩增SRY、-actin基因片段-------------------------------------------7 5、琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物---------------------------------------------7 6、紫外透射分析仪观察扩增结果---------------------------------------------7 四、实验结果------------------------------------------------------------------8 五、实验讨论------------------------------------------------------------------9 六、实验感悟-------------------------------------------------------------------9 七、参考文献-----------------------------------------------------------------10 八、致谢----------------------------------------------------------------------11  摘要 为了快速鉴定新生大鼠的性别，本研究参照哺乳动物SRY基因保守区序列设计引物，应用PCR扩增技术对其脑组织的性别决定基因SRY进行琼脂糖凝胶电泳实验，结果经多次检测，重复性好，检测的信度较高，可以为进一步的性别相关的脑功能研究提供可靠性别信息，并为进一步分析各种因素对脑组织功能的研究提供了保证。 关键词：PCR，大鼠，性别鉴定 一、选题背景 在动物克隆和转基因动物克隆发展的今天，供体细胞多以胎儿细胞为主，及早地获得已知性别的胎儿细胞系就显得尤为重要，因此可以利用PCR对新生个体进行性别鉴定，然后再根据需要进行有目的的处理。 Sinclair等在1990年发现在哺乳动物Y染色体上存在性别决定区（Sex determining region of Y），即SRY基因。当将携带SRY基因的一段基因组片段作为转基因导入XX小鼠胚胎，竟然实现了由雌性向雄性的性别反转，这一实验证明了SRY基因是哺乳动物的性别主宰基因。如果Y染色体存在，SRY基因将自启动转录，在胚胎睾丸组织细胞系中表达产生SRY因子。SRY因子主要产生三方面的作用：一是激活下游的苗勒氏体抑制物基因MIS（副中肾抑制基因）表达，从而抑制苗勒氏管的发育；二是抑制或对抗DSS（逆性别剂量敏感基因）基因产物，进而抑制卵巢发育；三是作用于间质细胞，使之分泌睾酮，使胎儿雄性化，导致阴茎、阴囊和其他雄性器官的形成。对于雌性动物，由于SRY基因的缺少，使得X染色体短臂上DSS位点基因转录，促进卵巢发育，而卵巢产生的雌激素使苗勒氏管发育成输卵管、子宫等。 Herr等在1990年首先成功建立了牛、羊胚胎性别鉴定的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）法[1,2]。PCR法因其特异性强、灵敏度高、快速、简便、经济等优点，在家畜早期胚胎的性别鉴定中占有越来越重要的位置，其实质就是Y染色体特异性片段或Y染色体上性别决定基因的检测技术。即通过合成SRY基因或其他Y染色体上特异性片段的部分序列作为引物，在一定条