分子荧光和分子磷光分析法.ppt

8.7.1 发光机理(Jablonski Diagram) 荧光光谱的特点 Stokes位移：分子荧光的发射峰相对于吸收峰位移到较长的波长. 荧光发射光谱的形状与激发波长的选择无关. 镜像规则：荧光发射光谱和它的吸收光谱呈镜像对称关系. 8.7.2 定量分析的基础 —荧光强度(F )与物质浓度(c)的关系 8.7.3 荧光与分子结构的关系 1.共轭效应 ? →?* 跃迁 芳香族化合物、五元杂环上取代苯基. 共轭体系越大,越易产生荧光,荧光效率也增大. 3,4-苯并芘 3. 取代基的作用 给电子基增强荧光： －OH,－OR,－NH2,－NHR,－NR2,－C≡N 吸电子基减弱荧光： －COOH,－C=O,－NO2,－N＝N,－Cl,－Br,－I 与?体系作用小的取代基影响不明显： －SO3R,－NH3＋,－SH,－F,－R。 取代基之间若发生氢键，增强分子平面性和刚性会加强荧光: 8.7.4 影响荧光强度的主要因素 1. 浓度：稀溶液，F∝c (?bc≤0.05) 2. 光源： F∝I0 ， 应强度大，稳定。 8.7.5 荧光光度计及荧光测定方法 荧光仪部件 激发光源: 能够在紫外-可见光区连续发光， 常用氙灯、高压汞灯或激光光源. 样品池: 石英池, 四壁透明. 单色器: 两个光栅单色器, 分置于样品池前后. 检测器: 光电池或光电倍增管, 与激发光成直角的 方向检测荧光. 荧光光度计光路图 测定方法—标准曲线法 1. 确定?ex和?em (激发光谱和发射光谱)； 2. 确定适宜的条件: 试剂浓度、pH、T、t 等； 3. 以标准溶液做工作曲线； 4. 测未知样的荧光强度(F), 根据工作曲线计算荧光物质的浓度. 8.7.6 荧光分析法的特点和应用 灵敏度高：测定下限0.1～0.001 μg/mL, 比分光光度法高2～4个数量级。 （在黑背景下检测；光源的强度大） 选择性高： 适当选择激发光的波长和荧光测定的波长； 应用荧光寿命的差别 –时间分辨技术。 荧光光度法的应用 生物化学分析，生理医学研究，临床检测. 直接测定能产生荧光的物质. 带苯环的氨基酸：色氨酸、酪氨酸、苯基丙氨酸. 测定能与荧光试剂反应生成荧光化合物的物质. 荧光生色团标记蛋白质，研究蛋白质的结构； 致癌物同核酸结合常引起显著的荧光； 无机离子（Mg2+、Al3+、Zn2+、Be+等）可同试剂形成荧光络合物。 荧光熄灭法测定猝灭剂 Ni2+对Al-PAN络合物有荧光猝灭作用，可测Ni2+（ 6×10-5 ～6×10-3 ?g·mL-1） 用于测定无机离子的有机试剂 举例— 痕量3,4-苯并芘的测定: 8.7.7 磷光分析法 获得较强磷光应采取的措施： 1. 低温， 低温磷光的样品装置 转筒式磷光镜（a）和转盘式磷光镜（b） 第4章 1. 平衡常数:各级形成常数Ki、不稳定常数K不、酸的质子化常数K H、累积形成常数?i ；分布系数。络合反应的副反应系数（?Y 、?M 、?MY）与条件常数（K ?）的计算。 2. 络合滴定基本原理：金属指示剂的作用原理; 滴定曲线，终点误差，误差公式，可以准确滴定的条件（lgcK ?≥6）；单一离子滴定时最高酸度与最低酸度的限制及酸度控制。 3. 混合离子的选择性滴定: 可控制酸度分步滴定的条件(?lgcK≥6), 适宜酸度; 络合掩蔽及解蔽的应用; 氧化还原掩蔽法及沉淀掩蔽法的应用示例。会设计分析方案。 4. 络合滴定的方式和应用: 直接滴定、返滴定、析出法、置换滴定、间接滴定法应用示例； EDTA标准溶液的配制和标定，水质对测定结果的影响。 第5章 反应完全程度: 不同类型的反应对 要求不同 2. 影响反应速度的因素: 浓度、温度、催化剂、诱导反应 3. 滴定曲线: 与 有关, 与浓度无关 4. 指示剂: 氧还、自身、专用 5. 各种方法的特点、应用条件、测定事例 6. 计算: 等物质的量规则(基本单元), 换算因数法 第6、7章 1. 掌握莫尔法、佛尔哈德法、法扬司法中所用的指示剂、方法特点、应用条件。 2. 掌握溶解度与溶度积、条件溶度积的换算关系; 4. 了解重量法的特点, 沉淀重量法的分析过程及对沉淀形、称量形的要求； 5. 一般了解沉淀的形成过程和影响沉淀纯度的因素； 6. 掌握晶形沉淀的条件和称量形的获得。 1. 分子对光的吸收