宋传旺医学免疫学Ch22 免疫学检测技术的基本原理课件.ppt

第二十二章 免疫学检测技术的基本原理 免疫学检测技术： 运用免疫学原理设计的检测方法 可用于： 诊断免疫相关性疾病 探讨发病机制 监测病情和治疗效果 第一节 抗原或抗体的检测 一、抗原抗体反应的特点： （一）特异性：Ag（表位）与Ab(CDR)的结合 可逆性：非共价键结合 可见性：Ab与Ag的比例合适 ? 形成肉眼可见聚合物。 阶段性：特异性结合阶段：几秒~几分钟 可见反应阶段： 几分钟~几小时~几 十小时 二、影响抗原抗体反应的主要因素： Ag与Ab的浓度、 比例 抗原与抗体的种类： 抗原的类型： 颗粒性抗原：细胞，细菌，人工微球/珠 可溶性抗原：细胞成分，蛋白分子，小分子化合物 抗体的类型： 多克隆抗体(抗血清): 识别多个表位，特异性差 单克隆抗体：识别单个表位， 特异性好 抗-抗体（二抗）：抗异种Ig的抗体 三、抗原或抗体的检测方法 （一）凝集反应： 颗粒性抗原（或可溶性抗原吸附在与免疫无关的载体上）与相应抗体在适当条件下形成肉眼可见的凝集小块。 1、直接凝集反应： 天然颗粒性抗原（细菌或细胞）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象 ： （1）玻片法—定性试验：已知 Ab ? 未知 Ag(?) ABO血型鉴定， 细菌种属抗原型别的鉴定 乳胶妊娠试验 （二）沉淀反应 (precipitation) ： 可溶性性抗原与相应抗体直接结合，在适当条件下形成肉眼可见的沉淀现象（沉淀线）。 ３、免疫电泳 （immuno electrophoresis) （四） 免疫标记技术 －用标记抗体或抗原进行抗原抗体反应： 1、免疫荧光技术 （immunofluorescence techniques） 1、免疫荧光技术 （immunofluorescence techniques） 2、免疫酶标技术： 用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生特异性结合 加入酶的底物，在酶作用下产生有色物质 根据颜色可作出判断或测量光密度值 （1）双抗体夹心法： （2）间接法 3、放射免疫测定（radio immunoassay，RIA）： 利用放射性同位素标记技术检测抗原的技术 灵敏度高，用于检测激素等血清中微量物质 第二节 免疫细胞测定 一、免疫细胞的分离 外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞。 红细胞密度：为1.093左右， 多核白细胞密度：为1.092左右， 淋巴细胞和单核细胞密度：1.075～1.090， 血小板密度：1.030～1.035。 方法：密度梯度离心法 分离液：聚蔗糖泛影葡 胺 （比重：1.077 ±0.001） （二）淋巴细胞的纯化： 贴壁法——去除单核细胞 （三）免疫磁珠分离法： （四）FACS分离法： 二、T细胞数量检测： 1、E花环试验： 原理：T细胞均有CD2分子，而B细胞无; 将SRBC与人外周血淋巴细胞混合; SRBC可结合于T细胞周围形成花环细胞。 三、免疫细胞功能测定 （一）T细胞功能测定 １、Ｔ细胞增殖试验 　 用T细胞敏感刺激物体外刺激T细胞， T细胞发生增殖、转化，根据增殖转化能力评价T细胞功能。 　 2、皮肤试验（体内实验） 结核菌素皮肤试验： 即OT/PPD皮试。 ---反映体内细胞免疫功能水平。 以迟发型超敏反应检测细胞免疫功能。 （二）B细胞功能测定 １、B细胞增殖试验 LPS、SPA、抗IgM抗体 B细胞受丝裂原刺激后分裂增殖，培养一定时间后计数抗体形成细胞的数目。 （三）细胞毒试验 　　CTL、NK细胞对靶细胞有直接杀伤作用，依据待检细胞的性质，选用相应靶细胞，根据靶细胞破坏程度，鉴定相应细胞的功能。 （四） 细胞因子的检测 1、免疫学检测： 2、生物活性检测法 　 1、免疫学检测法 　　（1）ELISA（双抗体夹心法） 　　（2）ELISPOT （3）FCM法 第三节 免疫学检测方法的应用 １、感染性疾病 ２、免疫缺陷病 ３、自身免疫病 ４、超敏反应