动物生理学Idepandent Designed Experiment.docx

测定Ca2+对兔血液凝固曲线，红细胞脆性测定实验目的探索Ca2+浓度对于兔血液凝固的影响曲线测定兔红细胞的脆性实验原理1.血液凝固可分为三个主要步骤:第Ⅰ阶段是凝血因子FX激活成FXa并形成凝血酶原复合物（凝血酶原激活物）第Ⅱ阶段是凝血酶原（Prothrombin，FⅡ）激活成为凝血酶（thrombin，FⅡa）第Ⅲ阶段是纤维蛋白原（FI）转变成纤维蛋白（filbrin，FIa）在这三个主要步骤中都需要Ca离子的参与2.正常的红细胞混悬与等渗的血浆中。若置于高渗溶液中，则红细胞失去内部液体而皱缩；置于低渗溶液中，则水分进入红细胞，使红细胞两面凹陷的圆盘形变为球形，如继续膨大，细胞膜发生破裂，血红蛋白溢出，即溶血。红细胞脆性试验就是测定红细胞对低于0.9%NaCl的耐受能力。耐受力高，红细胞不易破碎，即脆性低。反之，耐受力低者，红细胞易于破裂，既脆性高。凡上层液开始微呈淡红色，而极大部分红细胞下沉，称开始溶血或最小抗力。凡液体开始呈均匀红色，管底无红细胞下沉，则称开始完全溶血或者最大抗力。各种有机溶剂，酸或者碱也会使红细胞发生裂解，称为化学性溶解。实验对象与器材：大兔一只，兔手术保定台，烧杯（500ml，50ml），常用手术器械（手术刀、毛剪、手术剪、止血钳），线动脉套管，动脉夹，5毫升试管，离心机，天平，5ml 注射器，试管，试管架，吸管，2％戊巴比妥钠，5％草酸钾，1%NaCl溶液实验步骤：1.2％戊巴比妥钠按1ml/kg的剂量从耳缘静脉注入实验用兔，麻醉后仰卧固定于手术台上（同时准备实验用试管等）2.剪去颈部术野的被毛，切开皮肤，找出两侧颈动脉3.将颈动脉剥离2厘米左右，然后在颈动脉下面穿两条线。将一侧颈动脉在远心端用线结扎，再于近心端用动脉夹夹住。结扎处与动脉夹之间最好不少于1.5厘米4.用眼科剪刀在这段动脉上靠近结扎处1／4的地方，斜向近心方向剪一小口，将动脉套管插入，用线扎好，以免滑脱，待用（需采集血样时打开动脉夹即可）5.准备一只烧杯，向烧杯中注入一定量得新鲜血液。将血液平均分为五组，各5毫升，然后分别滴加不同量的草酸钙，测定血液凝固时间，然后作图6.配置不同浓度的氯化钠溶液加入试管两滴，分别加入等量已抗凝血液，观察红细胞是否溶血溶液配置管号123456789101%NaCl（ml）1.401.301.201.101.000.900.800.700.600.50蒸馏水（ml）0.600.700.800.901.001.101.201.301.401.50NaCl浓度（%）0.700.650.600.550.500.450.400.350.300.251.未溶血试管：血液下层有大量红细胞下沉，上层为无色透明，表明无红细胞破裂2.不完全溶血试管：液体下层有红细胞下沉，上层出现透明淡红色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血3.完全溶血试管：血液完全变成透明红色，管底无红细胞下沉5. 注意事项1.采血过程要尽快，以减少即使误差每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大判断血液的标准要一致，一般以倾斜试管达45°时试管内血液不见流动为准2.试管要干净，加抗凝血的量要一致 配置NaCl溶液时应为求准确、无误混匀时，轻轻倾倒1~2次，减少机械震动，避免人为溶血 静置时间足够，应在管线明亮处判断结果预期实验现象（1）.在钙离子试验中，能分别得到五组数据，所测得凝固时间与所加草酸钾的浓度相关，随着草酸钾浓度的升高，凝固时间越来越长，到某一定值得时候，草酸钾恰好将血液中的所有钙离子中和完，血液无法凝固，凝固时间无穷大。所得的曲线应该近与图中所画曲线。原本在实验设计中打算同时做一组增加Ca2+浓度的实验组，但是担心增加Ca2+以后，血液凝固速度过快，难以控制和计时，所以放弃了。所得到的结果，应该在一定范围内血液凝固时间随着Ca2+浓度增加而增加，当血液中Ca2+浓度小于一定值时血液不凝固，时间趋向无穷大，当钙离子浓度增加到一定程度时，再增加钙离子也无法加快血液凝固速度，血液速度达到最大值。（2）.红细胞脆性试验中，红细胞在高盐溶液中裂解，释放出血红蛋白，血液完全溶解，地步无沉淀，在低浓度下，红细胞沉淀，在中间某处，红细胞恰好溶血，其浓度就可以测得红细胞的脆性。实验数据记录管号1号试管2号试管3号试管4号试管5号试管草酸钾0.5%1%2.5%4%5%凝固时间(min）860未凝未凝未凝实验分析与讨论试验中，测定加入草酸钾浓度对于凝固时间的实验没有成功，主要原因在于草酸钾设定的浓度过高了，0.5%比较适合，所以应该将浓度在0.5%~1%之间再细分成几组。就不会发生后面几组凝固时间无法测得的问题了。红细胞脆性测定实验比较成功，在第四组恰好完全溶血。红细胞的等渗溶液大约等0.55%