MgSO4对急性胎兔宫内窘迫脑损伤NMDAr1表达影响病理学研究.docVIP

MgSO4对急性胎兔宫内窘迫脑损伤NMDAr1表达影响病理学研究 　　[摘要] 目的 建立孕兔宫内窘迫模型，探讨硫酸镁（MgSO4）胎兔脑损伤后NMDAr1表达的影响。 方法 新西兰大白兔孕兔39只，随机分为空白对照组（n=12）、假手术组（n=9）、缺血缺氧脑病组（n=9）和MgSO4保护组（n=9），缺血缺氧组和MgSO4保护组建立孕兔开腹子宫动脉结扎胎兔宫内窘迫缺血缺氧模型，并且MgSO4保护组在建立模型前给予腹腔注射MgSO4（100 mg/kg），分别开腹取各组胎兔脑组织做病理及NMDAr1表达检测。 结果 与空白对照组和假手术比较，缺血缺氧脑病组和MgSO4保护组NMDAr1表达强阳性，脑组织结构层次被破坏，神经细胞变性坏死，间质出血；MgSO4保护组NMDAr1免疫反应强度低于缺血缺氧脑病组，而脑组织结构层次完整性优于缺血缺氧脑病组。 结论 MgSO4在一定程度上能减轻NMDAr1导致的胎儿宫内窘迫缺血缺氧病理性脑损伤，对NMDA脑损伤具有一定的保护作用。 　　[关键词] MgSO4；胎兔；缺血缺氧脑病；NMDAr1；病理学研究 　　[中图分类号] R-332 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）12（c）-0011-03 　　围生期缺氧导致新生儿窒息严重危害新生儿健康，并且常伴有严重的远期后遗症[1]。新生儿窒息具有较高的病死率和神经系统后遗症发生率，对社会人口素质具有极严重影响。由于围生期缺氧的80%～90%起源于分娩前或分娩时的窘迫，只有约10%左右发生在分娩后，及时治疗胎儿宫内缺氧、降低新生儿窒息发生的重点在产科[2]，因此，如果能够对胎儿窘迫尽早进行有效干预即可显著降低围生期新生儿脑损伤发生率及致残率[3-5]。本实验研究根据胎儿宫内窘迫的病理生理特点建立科学合理的动物模型，研究MgSO4对胎兔急性宫内窘迫脑损伤的保护作用，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要仪器、试剂及动物 　　健康成年新西兰大白兔4周左右孕兔，普通级，体质量3.2～3.7 kg，由上海松江松联实验动物场生产，厦门大学医学院动物中心提供。动物许可证：SCXK（沪）2007-0011。实验动物使用单位许可证编号：SYXK（军）2002-47。动物实验人员资质许可证编号：军动管字第2006E01028。实验孕兔饲养3 d，每日傍晚测体温、脉搏、呼吸1次，至孕32～34 d实验，剔除异??极值动物，经统计分析，个体间无明显差异。编号按随机表分成4组，空白组12只、假手术组9只、缺血缺氧性脑病组9只、MgSO4预保护组9只。 　　1.2 实验方法 　　妊娠34 d孕兔以2.5%戊巴比妥钠0.2 ml/kg进行腹腔麻醉后，耻骨区下腹部正中切口打开腹腔，暴露双侧子宫角，检查胎盘、子宫及孕兔活力。分离出进入每个胎盘的分支动静脉血管，缺血缺氧性脑病组胎兔用无创性血管夹钳夹此分支血管，持续20 min，然后松开血管夹，恢复血流。6 h后处死胎兔取脑组织，4%甲醛固定，进行显微镜下病理检查。假手术组胎兔，在分离出进入每个胎盘的分支血管后，不钳夹分支血管，6 h后处死取脑组织进行病理检查。空白组对照胎兔，不进行任何手术处理，直接取处死脑组织行病理检查。MgSO4预保护组，予以MgSO4 100 mg/kg，生理盐水稀释成20 ml，孕兔腹腔内注射，1 h后按照缺血缺氧脑病组方法制作胎兔脑缺血缺氧模型并做病理检查。 　　1.3 脑组织病理检测 　　取4%甲醛固定脑组织，石蜡包埋，切片行HE染色，光镜下观察形态学变化，由同一病理医师采用盲法评价。观察脑组织结构层次是否完整，神经细胞肿胀、变性、坏死，间质出血、水肿等情况。 　　1.4 脑组织NMDAr1免疫组织化学表达的测定 　　取4%甲醛固定脑组织，石蜡包埋，连续切片（4 μm），每例标本切5张免疫组织化学染色用。采用改进型SP法进行免疫组织化学染色，严格参照试剂盒说明操作。抗NMDAr1（N-methyl-D-asparate receptor-1，NMDAr1）蛋白试剂盒，北京博奥森公司生产。每次染色时均用已知阳性切片作阳性对照，用PBS（磷酸缓冲液，0.01 mol/L，pH值7.2）代替一抗作阴性对照。NMDAr1表达均位于胞质和胞核内，表现为浅黄、棕黄或棕褐色。用半定量法评估其染色，无阳性细胞数为（-），阳性细胞数75%为（++++）。 　　2 结果 　　2.1 脑组织HE染色结果 　　空白组和假手术组胎兔脑组织切片HE染色示，脑皮质各层发育正常，其中分子层、内颗粒层、外颗粒层以及锥体细胞层均匀致密，完整；锥体细胞数量中等，胞体较小致密，轴突干净完整、延伸，胞核居中；白质间少量血管，肌浆红染，胶质丰富，血管腔内可见红细胞（图